眼科抗菌藥物諾氟沙星和加替沙星對(duì)人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用研究.pdf

1、隨著眼表炎癥的日益增多，抗菌消炎類眼藥在眼表感染中應(yīng)用也越來越廣泛。諾氟沙星和加替沙星分別屬于第三代和第四代喹諾酮類藥物，具有抗菌作用強(qiáng)、抗菌譜廣等優(yōu)點(diǎn)，已在臨床眼科細(xì)菌性感染治療中廣泛應(yīng)用，但其引起的毒副作用也日益凸顯，該藥物對(duì)角膜的毒副作用也越來越受到研究者的關(guān)注。而角膜內(nèi)皮層作為角膜基質(zhì)和前房間的屏障，對(duì)維持角膜的透明性起到至關(guān)重要的作用，哺乳動(dòng)物角膜內(nèi)皮細(xì)胞（除兔外）在成年后即失去再生能力，一旦損傷就無法修復(fù)，而目前關(guān)于諾氟沙星

2、和加替沙星對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞影響作用的研究主要是以動(dòng)物或臨床應(yīng)用為研究對(duì)象，耗資大周期長(zhǎng)，具有一定的風(fēng)險(xiǎn)，在很大程度上制約了研究的范圍及進(jìn)程，且至今仍未見有關(guān)該類藥物對(duì)體外培養(yǎng)的角膜內(nèi)皮細(xì)胞毒性作用機(jī)理的研究報(bào)道，因此本文研究諾氟沙星和加替沙星對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的毒性作用及其機(jī)理。
　　本文選用諾氟沙星和加替沙星兩種喹諾酮類藥物為實(shí)驗(yàn)藥物，利用本實(shí)驗(yàn)室自建的非轉(zhuǎn)染、無致瘤性人角膜內(nèi)皮（Human Corneal Endothelium，H

3、CE）細(xì)胞系細(xì)胞為材料，通過光鏡觀察、AO/EB熒光雙染色、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)、透射電鏡觀察研究喹諾酮類抗菌藥物對(duì)體外培養(yǎng)的HCE細(xì)胞的影響，并以家貓作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行在體檢測(cè)和離體鑒定。根據(jù)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果準(zhǔn)確評(píng)價(jià)兩種喹諾酮類抗菌藥物對(duì) HCE細(xì)胞的毒性作用，進(jìn)一步為諾氟沙星和加替沙星的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　體外實(shí)驗(yàn)表明諾氟沙星和加替沙星分別在0.75~3 g/L和0.375~3 g/L的濃度范圍內(nèi)能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的H

4、CE細(xì)胞發(fā)生凋亡，細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的皺縮、空泡化、變圓、質(zhì)膜通透性提高、DNA斷片化、產(chǎn)生凋亡小體等變化，且具有濃度和時(shí)間依賴性。家貓?jiān)隗w檢測(cè)結(jié)果表明臨床濃度（3 g/L）的諾氟沙星和加替沙星對(duì)家貓給藥20天后，角膜內(nèi)皮細(xì)胞密度降低，平均面積增大，與第0天時(shí)存在顯著性差異（P<0.05）；面積變異系數(shù)和六角形細(xì)胞比率分別有所上升和下降，但與第0天相比無顯著差異（P>0.05）。此外，與諾氟沙星給藥組相比加替沙星給藥后家貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞各項(xiàng)