胡椒堿對小鼠體內(nèi)去甲替林藥代動力學(xué)及腦血分布的影響研究.pdf

1、一、目的：
　　 考察小鼠體內(nèi)分別給予生理鹽水、胡椒堿及維拉帕米后，對去甲替林多劑量藥動學(xué)和腦/血濃度比值的影響，探討作為生物利用度增強劑的胡椒堿對進入血腦屏障藥物的影響，是否會影響去甲替林的療效或?qū)χ委煷靶〉乃幬锂a(chǎn)生毒性作用。對指導(dǎo)臨床用藥具有一定的意義。
　　 二、方法：
　　 1.實驗動物及給藥方法
　　 1.1實驗動物分組
　　 選用清潔級健康成年雄性昆明種小鼠216只(25±3g)，按完

2、全隨機分組設(shè)計分為四大組，每組54只(6/組×9個時間點)：低劑量胡椒堿組(L)，高劑量胡椒堿組(H)，維拉帕米組(V)，生理鹽水組(B)。四組均于最后一天腹腔注射去甲替林。
　　 1.2給藥劑量
　　 本試驗維拉帕米劑量為5 mg/kg，去甲替林為15 mg/kg。
　　 黑胡椒中胡椒堿的含量大約為5％～9％，在人體中，大約每天食入胡椒堿的用量大約為60-110μmol。按照人體每日攝入胡椒堿的量換算至小鼠后，

3、所得劑量為170μg/kg，此劑量即為本實驗低劑量組所給予的胡椒堿的用量。
　　 根據(jù)文獻報道，小鼠試驗中，胡椒堿藥物相互作用中所用到的劑量，且文獻報道此劑量對小鼠不會產(chǎn)生毒性。且為了與維拉帕米對照組進行比較，我們選用5mg/kg的劑量為高劑量組用量。
　　 1.3樣品采集
　　 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按照分組，四大組分別連續(xù)7天灌胃給予低劑量胡椒堿(170μg/kg)，高劑量胡椒堿(5 mg/kg)，維拉帕米(

4、5mg/kg)及生理鹽水0.4 ml。第8天，試驗前一天禁食12 h后，繼續(xù)灌胃給予以上藥物，1h后，腹腔注射給予去甲替林(15 mg/kg)后，分別于5，15，30 min，1，2，4，6，8，12 h摘除眼球采血。血液置于肝素抗凝EP管內(nèi)，15000 rm/min離心制備血漿。小鼠處死后快速取出小鼠腦組織，腦組織用生理鹽水洗凈，濾紙吸干表面水分，稱重。血漿及腦組織樣品均于-70℃冰箱保存待測。
　　 2.生物樣品測定方法

5、r>　　 采用LIPLC-MS/MS法測定血漿和腦組織勻漿液中去甲替林濃度。
　　 3.數(shù)據(jù)處理
　　 以Excel及SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析處理，小鼠血漿及腦組織AUC及腦血比值面積使用單因素方差分析檢驗；t1/2使用多個獨立樣本非參數(shù)檢驗。
　　 三、結(jié)果：
　　 1.方法學(xué)
　　 1.1去甲替林的測定方法學(xué)
　　 血漿及腦組織中去甲替林與內(nèi)標氯米帕明分離良好。血漿及腦組織內(nèi)去甲

6、替林和內(nèi)標保留時間分別為1.42 min和1.93 min。在5.00～5000.00 ng·mL-1線性范圍內(nèi)各待測物在血漿及腦組織中的線性良好，最低定量限為5 ng·mL-1。若有超過線性范圍的濃度，使用空白血漿稀釋后，按血漿樣品處理方法處理后進樣，所得濃度乘以稀釋倍數(shù)即為血漿藥物濃度。血漿中萃取回收率各待測物>78.66％，腦勻漿中各待測物>78.34％，血漿和腦勻漿日內(nèi)精密度RSD為2.94％～9.30％；日間精密度RSD為3.

7、00％～7.85％。低，中，高三種濃度的質(zhì)控樣品穩(wěn)定性良好，濃度變異均小于9.27％。
　　 2.小鼠腹腔注射去甲替林后，測得去甲替林在小鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)及腦/血漿藥物濃度的比值。
　　 B、L、H和V組中去甲替林在血中AUC0-12分別為3645.77±778.60，4527.37±938.29，3989.90±307.15，6338.88±974.8 ng·h·mL-1；AUC0-∞分別為3042.05±765

8、.31，3825.07±1090.70，3185.37±922.61，5155.18±1205.12 ng·h·mL-1；t1/2分別為2.62±1.36，2.75±1.22，3.37±1.62，3.78±2.44 h；統(tǒng)計結(jié)果表明，V組的AUC0-12及AUC0-∞和B、L、H組相比有顯著性差異(P<0.05)，而四組t1/2均沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 腦勻漿液中 AUC0-12分別為19750.33±2281.08，22353

9、.33±2751.84，20200.07±2838.54，41162.40±7836.38 ng·h·g-1；AUC0-∞分別為19219.22±2471.23，20919.67±3485.21，19660.18±2843.12，37458.47±10339.38 ng·h·g-1；t1/2分別為1.82±0.37，2.30±1.14，1.77±0.40，2.33±1.06 h；統(tǒng)計結(jié)果表明，V組的AUC0-12及AUC0-∞和B、L、

10、H組相比有顯著性差異(P<0.05)，而四組t1/2均沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 腦血比(AUC brain/AUC blood)為59.61±9.93，42.35±5.48，59.03±6.99，67.47±10.10 ml·g-1；L和B、H、V之間有統(tǒng)計學(xué)差異，但L組比值小于其余三組，而B、H和V組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 四.結(jié)論：
　　 1.方法學(xué)
　　 本實驗方法可準確、快速測定小鼠血漿及腦勻漿

11、中去甲替林的濃度，用以考察胡椒堿對去甲替林透過血腦屏障的影響。
　　 2.動物實驗
　　 長期給予胡椒堿后，胡椒堿使得小鼠體內(nèi)去甲替林在血漿和腦中的藥物濃度增加，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義。而對于更具意義的腦血比值來說，低劑量胡椒堿組腦血比值低于其余三組，且有統(tǒng)計學(xué)差異，低劑量的胡椒堿可能對P-gp在腦組織中存在誘導(dǎo)作用；高濃度的胡椒堿對血腦屏障上P-gp作用較小。
　　 P-gp的抑制劑維拉帕米能夠抑制P-gp的功能，增