荷葉生物堿的分析及其體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、荷葉(Folium Nelumbinis)是睡蓮科植物蓮的葉片，在我國(guó)大部分地區(qū)都有廣泛種植，是極具開發(fā)價(jià)值的藥食兩用植物。生物堿是荷葉中最主要的活性成分之一，雖然含量甚微，但其在降脂減肥、抑菌、抗病毒以及鎮(zhèn)靜、抗驚厥方面均有顯著的生物活性。目前對(duì)生物堿的研究大多集中在化學(xué)成分提取分離、含量測(cè)定上，也有關(guān)于總堿或荷葉堿藥理方面的報(bào)道，其他研究則鮮有涉及。本文對(duì)荷葉生物堿進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，包括荷葉總生物堿的提取純化;總堿中主要成分的分

2、離鑒定;不同來(lái)源荷葉生物堿的含量測(cè)定;主要生物堿在大鼠血漿和腦中的藥代動(dòng)力學(xué)研究，從而為荷葉資源的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下;
　　1.荷葉生物堿的提取及分離以湖南產(chǎn)荷葉為原料，首先對(duì)總生物堿的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，分別對(duì)鹽酸濃度、溶劑量、提取次數(shù)、提取時(shí)間四因素進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)考察，進(jìn)一步比較了四種陽(yáng)離子交換樹脂XSI-004、XSI-008、D001、D113的純化效果，最終確定總生物堿的最佳提取

3、純化工藝為;以30倍的0.2％HCl水溶液為提取溶劑，提取3次，每次3小時(shí)。提取液經(jīng)D001型陽(yáng)離子交換樹脂純化得到總生物堿，得率為10.9g/kg生藥。進(jìn)一步利用反相硅膠柱層析和高效液相制備色譜法分離得到兩種單體化合物，HPLC歸一化法檢測(cè)純度均大于97％，且經(jīng)過(guò)質(zhì)譜、核磁共振碳譜、氫譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。將獲得的光譜數(shù)據(jù)與已有文獻(xiàn)對(duì)照，確定所分得的化合物分別為2-羥基-1-甲氧基阿樸啡(2-hydroxy-1-methoxyaporphi

4、ne，HMA)及N-去甲荷葉堿(N-nornuciferine，N-NF)。
　　2.不同產(chǎn)地和不同采收期荷葉生物堿的成分比較建立同時(shí)測(cè)定HMA、N-NF、及荷葉堿(Nuciferine，NF)三種生物堿含量的高效液相色譜-紫外(HPLC-UV)檢狽方法，并比較了來(lái)自湖南、湖北、浙江、陜西、貴州、北京6個(gè)區(qū)域和北京6～10月間連續(xù)5個(gè)月采收的荷葉中這三種成分的含量變化。樣品以含0.2％鹽酸的70％甲醇為溶劑，利用超聲輔助進(jìn)行提取，

5、選用Agilent Extend-C18柱，以乙腈-含0.1％三乙胺的水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，實(shí)現(xiàn)HMA、N-NF和NF同時(shí)基線分離。結(jié)果顯示三個(gè)化合物在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，所建立的HPLC方法準(zhǔn)確可靠，具有良好的精密度、重現(xiàn)性及回收率，可用于荷葉生物堿的含量測(cè)定。含量比較發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地荷葉樣品中生物堿的含量差別明顯，其中以浙江產(chǎn)荷葉中總生物堿的含量最高，貴州、湖南次之。同一產(chǎn)地荷葉中以荷葉堿的含量最高。不同采收期的荷

6、葉生物堿含量比較發(fā)現(xiàn)，隨著生長(zhǎng)期的延長(zhǎng)，NF和N-NF含量逐漸降低，而HMA的含量逐漸升高，提示生物堿成分之間可能存在一定的生物轉(zhuǎn)化。該研究為篩選荷葉的優(yōu)良產(chǎn)地和采收時(shí)間提供參考。
　　3.荷葉生物堿在大鼠血漿中的藥代動(dòng)力學(xué)研究建立UPLC檢測(cè)方法，對(duì)N-NF和NF在大鼠血中的藥代動(dòng)力學(xué)和口服生物利用度進(jìn)行研究。SD雄性大鼠分別口服（50mg/kg）和靜脈(10mg/kg)給予荷葉總生物堿提取物(NF約45％，N-NF為20％)，

7、采用乙酸乙酯液-液萃取法對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)血漿樣品進(jìn)行處理。選用Thermo Syncronis C18柱，以乙腈和含0.05％三乙胺水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。應(yīng)用WinNonlin 6.2軟件以非房室模型計(jì)算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和絕對(duì)生物利用度。結(jié)果顯示血漿中NF和N-NF均在10～200ng/mL和200～5000ng/mL兩個(gè)濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，UPLC分析方法靈敏、準(zhǔn)確可靠。N-NF和NF在血漿中的藥物濃度-時(shí)間曲線基本一致，藥

8、動(dòng)學(xué)參數(shù)接近，相比之下，NF在體內(nèi)的吸收和消除速度均比N-NF快，具有較好的生物利用度(58.13％)，而N-NF吸收程度更好，生物利用度高達(dá)79.91％。
　　4.荷葉生物堿在大鼠腦內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究本研究通過(guò)腦微透析技術(shù)和超高效液相（UPLC）檢測(cè)方法聯(lián)用，首次探討靜脈給予荷葉總堿提取物后游離型藥物在大鼠腦內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特性。將腦微透析探針植入大鼠側(cè)腦室，以2μL/min的流速向透析管灌流含5mMβ-環(huán)糊精的人工腦脊液，對(duì)SD