荷葉生物堿的分析及分離純化研究.pdf

1、蓮為多年生水生宿根草本植物，在全世界有著廣泛的分布。同時(shí)，蓮也是我國(guó)最具特色、栽培面積最大、品系資源最豐富的水生經(jīng)濟(jì)植物。荷葉是睡蓮科蓮屬植物的葉，營(yíng)養(yǎng)豐富且含有生物堿和黃酮等多種活性物質(zhì)，是非常具有開(kāi)發(fā)價(jià)值的天然植物資源。
　　 本研究通過(guò)對(duì)荷葉生物堿的分析以及分離純化研究，為荷葉資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.本研究利用陽(yáng)離子固相萃取柱的定向吸附特性對(duì)樣品進(jìn)行凈化，利用快速分離液相-飛

2、行時(shí)間質(zhì)譜提供的精確分子質(zhì)量數(shù)，快速鑒定荷葉生物堿。樣品采用1％鹽酸超聲提取，經(jīng)固相萃取柱凈化，再用氨水-甲醇進(jìn)行洗脫，洗脫液濃縮后用甲醇定容。選用Welch Materials C18 柱，以乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，在正離子模式下，經(jīng)飛行時(shí)間質(zhì)譜分析，分離并檢測(cè)了9種生物堿。實(shí)驗(yàn)建立的快速分離液相-四級(jí)桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合陽(yáng)離子交換固相萃取柱前處理技術(shù)，可以快速準(zhǔn)確鑒定荷葉生物堿成分。
　　 2.本研究建立了荷葉中生物

3、堿類(lèi)化合物的快速分離純化技術(shù)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到了三個(gè)荷葉生物堿分離體系，分別為：四氯化碳/氯仿/甲醇/0.1 M 鹽酸（1/3/3/2，V/V）常規(guī)高速逆流分離體系和石油醚/乙酸乙酯/甲醇/水(5/5/2/8，V/V)、叔丁基甲醚/甲醇/水(4/1/5，V/V)兩個(gè)pH區(qū)帶逆流色譜分離體系。分離得到的4個(gè)生物堿單體純度均大于98％，且經(jīng)過(guò)質(zhì)譜和核磁共振對(duì)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)的鑒定。結(jié)果表明pH區(qū)帶逆流色譜法是一種高效的分離制備荷葉生物堿的技

4、術(shù)。
　　 3.采用超聲提取-高效液相聯(lián)用分析荷葉中的O-去甲荷葉堿、N-去甲荷葉堿、荷葉堿和蓮堿四種主要的生物堿，為荷葉及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制參考。選用Welch MaterialsC18 色譜柱，以乙腈-水（含0.1％三乙胺）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，實(shí)現(xiàn)了O-去甲荷葉堿、N-去甲荷葉堿、荷葉堿和蓮堿四種生物堿的同時(shí)基線分離。在0.1-50 μg/mL 濃度范圍內(nèi)，O-去甲荷葉堿、N-去甲荷葉堿、荷葉堿和蓮堿具有良好的線性關(guān)系，它