MAPK信號(hào)通路在二氧化硅誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)型中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究二氧化硅(Si02)體外誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞(HBE)上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)型(EMT)及MAPK信號(hào)通路在此過程中的作用機(jī)制。
　　 方法：(1)倒置顯微鏡觀察Si02處理HBE細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)改變；(2)用不同濃度矽塵(0μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，300μg/ml)處理HBE細(xì)胞72h后WestemBlot檢測(cè)上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-S

2、MA)、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白(Vimentin)蛋白表達(dá)水平的改變；(3)采用MAPK活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)Si02處理HBE細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)(Oh，0.5h，lh，2h，4h，8h)ERK和p38活性改變；(4)WesternBlot檢測(cè)經(jīng)不同濃度ERK、p38特異性抑制劑U0126和SB203580（10μM，20μM，30μM）預(yù)處理lh后，矽塵誘導(dǎo)的HBE細(xì)胞E-cadhefin、α-SMA和Vimentin蛋白表達(dá)的改變；(5)免

3、疫印跡檢測(cè)30μMM的U0126和SB203580兩者共同干預(yù)HBE細(xì)胞后E-cadhefin、Vimentin和α-SMA蛋白表達(dá)的改變。
　　 結(jié)果：(1)Si02處理HBE細(xì)胞后，Si02濃度在200μg/ml細(xì)胞形態(tài)變化最明顯，細(xì)胞失去了鋪路石樣改變，呈梭形、紡錘形；(2)不同濃度Si02(0，50，100，200，300μg/ml)處理HBE細(xì)胞72h后，隨著Si02濃度的升高，E-cad表達(dá)逐漸降低，α-SMA和Vi

4、mentin表達(dá)逐漸升高，在Si02濃度為200μg/ml時(shí)E-cad蛋白表達(dá)水平（1.42±0.10）明顯低于對(duì)照組的表達(dá)水平(3.74+0.95)(P<0.05)，E-cad在SiO2濃度為300μg/ml時(shí)最低，并且在100、200、300μg/ml組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；而α-SMA在Si02濃度為200μg/ml時(shí)達(dá)到高峰，為對(duì)照組的(5.09±1.98)倍，在200～300μg/ml時(shí)α-SMA表達(dá)略有下降，但仍高

5、于對(duì)照組(P<0.05)；Vimentin在Si02濃度為300μg/ml時(shí)最高，為對(duì)照組的(7.30±3.02)倍，在200、300μg/ml組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；(3)Si02作用于HBE細(xì)胞能誘導(dǎo)ERK和p38激酶活化，于30min開始出現(xiàn)ERK和p38磷酸化水平增高，分別于60min和30min之后逐漸減弱；(4)干預(yù)實(shí)驗(yàn)，免疫印跡結(jié)果顯示，U0126(20，30μpM)干預(yù)組，E-cadherin蛋白表達(dá)分別為Si

6、02(200μg/ml)處理組的（2.52±0.87）倍和（3.17±0.88）倍(P<0.05)，30μM的U0126預(yù)處理后，α-SMA和Vimentin表達(dá)減少，抑制率分別為40.43％和60.33％(P<0.05)；SB203580(30μM)干預(yù)組，E-cadherin表達(dá)為SiO2(200μg/ml)處理組的（1.77±0.26）倍(P<0.05)，α-SMA和Vimentin表達(dá)減少，抑制率分別為34.67％和55.44％