G蛋白偶聯(lián)受體激酶6同源二聚化的機制及其對胞膜定位的影響.pdf

1、獨創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得(洼；塑逡直墓絲盂要掛別直咽趁!丕欄亙窒2或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：汾嗣簽字日期：p心年／月歲日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解桂

2、林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》、《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在

3、解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：溉司導(dǎo)師簽字：簽字日期：加∥年／月；日簽字日期G蛋白偶聯(lián)受體激酶6同源二聚化的機制及其對胞膜定位的影響中文摘要目的：G蛋白偶聯(lián)受體激酶(Gproteincoupledreceptorkinases，GRKs)通過特異性地磷酸化配體激活的G蛋白偶聯(lián)受體(Gproteincoupledreceptors，GPCRs)，快速“關(guān)閉”或“減敏(desensitization)”激動劑持續(xù)引發(fā)的信號傳導(dǎo)，從而

4、調(diào)控GPCR介導(dǎo)的各種生理病理活動。GRK6屬于GRK4亞家族成員，在調(diào)節(jié)細胞功能代謝以及神經(jīng)元退行性變中發(fā)揮重要作用。GIⅨ6晶體結(jié)構(gòu)顯示，在氨基端區(qū)的G蛋白信號調(diào)節(jié)子(RGS)結(jié)構(gòu)域中存在一個由Ile39、Metl65、Tyrl66和Phe5274個疏水性氨基酸組成的同源二聚化作：界面，人工突變這些氨基酸殘基導(dǎo)致叫6蛋白的激酶活性顯著降低。因此，二聚化可能是GRK6調(diào)控GPCR的重要機制之一。迄今為止，還未有GRK在細胞內(nèi)形成二聚體

5、的報道。另一方面，定位細胞膜是GRK調(diào)控GPCR信號通路的前提條件，而GIⅨ6分子同源二聚化對其胞膜定位的影響目前還不清楚。本研究旨在揭示GIⅨ6在細胞內(nèi)同源二聚化的現(xiàn)象與機制、及其對GIⅨ6胞膜定位的影響。方法：首先，本實驗采用競爭性雙分子熒光互補(BiFCC)方法，在共轉(zhuǎn)染融合質(zhì)粒pBiFCGRK6VNl73／pBiFCGRK6VC155基礎(chǔ)上加入GRK6mChen了及pmCheqN1至玎三K293細胞中，檢測BiFC熒光信號改變。