BCMA-Fc作為潛在藥物的研究.pdf

1、B細(xì)胞刺激因子(BcellactivatingfactorfromtheTNFfamily,BLyS)，是腫瘤壞死因子家族中的一個新的成員，是在1999年發(fā)現(xiàn)的一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子，它存在兩種形式：一種是膜結(jié)合形式，另一種是可溶性蛋白的形式并且它能夠調(diào)節(jié)B細(xì)胞的分化和生長。B細(xì)胞成熟抗原(Bcellmaturationantigen,BCMA)是BLyS的一種受體，它是一種非糖基化的I整合膜蛋白，主要在成熟的B淋巴細(xì)胞中表達(dá)。本文中我

2、們主要鑒定了pET30a-BCMA-Fc重組質(zhì)粒，重新構(gòu)建一種pET28a-Fc重組質(zhì)粒，并對pET30a-BCMA-Fc,pET28a-Fc兩種融合蛋白進行了誘導(dǎo)表達(dá)，純化和生物學(xué)活性的鑒定。本文的主要目的是進一步闡述BLyS與其受體的相互關(guān)系，為未來自身免疫疾病和B細(xì)胞淋巴瘤的治療提供一個實驗基礎(chǔ)。
　　目前為止，我們已經(jīng)將制備出的Fc片段成功的插入到了pET28a原核表達(dá)質(zhì)粒中，成功的構(gòu)建出了pET28a-Fc重組質(zhì)粒。之后

3、，我們將pET30a-BCMA-Fc和pET28a-Fc重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，分別用IPTG進行誘導(dǎo)，SDS-PAGE檢測，蛋白A柱進行了純化，并獲得了高純度的融合蛋白BCMA-Fc和Fc。最后，我們用酶聯(lián)免疫吸附試驗分析出BCMA-Fc融合蛋白能夠特異性的與BLyS結(jié)合，并且隨著蛋白濃度的增加而呈現(xiàn)出一定的遞增，而Fc不能與BLyS特異性的結(jié)合。此外，我們還驗證了拮抗肽BC能夠特異性的抑制BCMA-Fc與BLyS的結(jié)合作用，并且其