疏水改性白芨多糖作為納米藥物載體的研究.pdf

1、目的：利用脂肪酸對白芨多糖（BSP）進(jìn)行疏水改性（hm-BSP）使之能夠自組裝形成納米膠束，并以水飛薊素（SM）為模型藥物考察hm-BSP對難溶性藥物裝載、轉(zhuǎn)運和釋放性能，綜合評價其作為納米藥物載體材料的安全性、可行性和可控性。
　　方法：（1）水提醇沉制得粗BSP，以還原糖得率為主要評價指標(biāo)、通過單因素試驗逐步優(yōu)化酶法降解粗BSP的工藝參數(shù)；產(chǎn)物進(jìn)一步經(jīng)乙醇分級沉淀收集不同分子量段的BSP，并分析其黏均分子量，比較紫外和紅外光譜

2、圖。（2）考察hm-BSP衍生物制備方法，核磁共振氫譜(1HNMR)和紅外光譜(FTIR)對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。制備hm-BSP衍生物自組裝納米膠束，芘熒光探針法檢測臨界膠束濃度（CMC），透射電鏡(TEM)觀測形態(tài)，激光粒度儀測量其粒徑及Zeta電位。以溶血性、細(xì)胞毒性和靜脈給藥的急性毒性為指標(biāo)評價hm-BSP的安全性。（3）超聲分散法制備載水飛薊素納米粒（SM-hm-BSP），以包封率為指標(biāo)，單因素試驗考察各制備條件，篩選出最優(yōu)制備工藝

3、。高效液相色譜(HPLC)測其載藥量和包封率，激光粒度儀測其粒徑與Zeta電位，TEM觀測形態(tài)?？疾炱潴w外累積釋放度；測試SM-hm-BSP細(xì)胞毒性，載香豆素6(C6-hm-BSP)細(xì)胞攝取量。
　　結(jié)果：（1）最佳酶解條件為配制20mg·mL-1的BSP溶液并調(diào)節(jié)pH為5.0，加入250U·mg-1的纖維素酶液，45℃保溫振蕩5h，煮沸5min滅活酶；體積分?jǐn)?shù)50％、70%、90%（mL/mL）的乙醇逐步沉淀后可得黏均分子量約為

4、5.3、3.7、1.1KD的BSP，紫外和紅外光譜圖無明顯差異，3.7KD的BSP適于進(jìn)一步改性。（2）采用有機系統(tǒng)制備hm-BSP衍生物：以DMSO為溶劑，利用N,N-二環(huán)已基碳二亞胺(DCC)為脫水劑，4-二甲氨基吡啶(DMAP)作催化劑，將不同鏈長脂肪酸接枝在BSP分子鏈的羥基上，形成hm-BSP衍生物分別為hm-BSP-C12、hm-BSP-C16、hm-BSP-C18。1HNMR、FTIR均表明脂肪酸成功的接枝到BSP上，且h

5、m-BSP-C18取代度最高。測得hm-BSP衍生物的CMC隨脂肪酸鏈長而減小，分別為0.028mg·mL-1、0.040mg·mL-1、0.058mg·mL-1，粒徑在250～400nm之間，Zeta電位均為中性。且hm-BSP-C18粒徑最小為250nm，Zeta電位為–(0.57～0.07)mV，TEM觀測其形態(tài)為球形均勻分布。測得hm-BSP-C18無溶血毒性和細(xì)胞毒性，小鼠靜脈給藥后，觀察7d無死亡，生長狀態(tài)良好，最大耐受量大

6、于300mg·kg-1。（3）單因素篩選SM-hm-BSP最佳制備方法：hm-BSP-C18以2.5mg·mL-1濃度分散于蒸餾水，將加藥量為10%載體量的SM溶解于0.5mL無水乙醇中，緩慢滴加至上述聚合物水溶液中，磁力攪拌24h后，冰浴超聲10min(超聲功率200W，工作2s，間歇3s)，溶液于3500rpm離心20min，上清液過0.45μm濾膜，得到載藥納米粒溶液。測得其載藥量和包封率分別為7.31%±0.05%和78.86%

7、±0.66%。TEM觀測到其載藥膠束呈均勻球形分。激光粒度儀測得粒徑為(200.83±8.10)nm，Zeta電位為-（0.36±0.93）mV。SM-hm-BSP在37℃，pH=7.4PBS溶液中可持續(xù)釋放8d，在165h時，釋藥量在90%以上，釋放曲線符合Higuichi模型。CCK-8法測得其細(xì)胞毒性高于SM，且隨時間變化較明顯。C6-hm-BSP細(xì)胞攝取試驗顯示其攝取量明顯高于游離C6。
　　結(jié)論：酶法降解粗BSP高效、簡