SPHK1作為鼻咽癌預后因子及潛在治療靶點的研究.pdf

1、研究目的:鞘脂類的代謝產(chǎn)物如神經(jīng)酰胺(Cer)、鞘氨醇(Sph)、1磷酸鞘氨醇(S1P)等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，而鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase1，SPHK1)是調(diào)節(jié)鞘脂類平衡的關(guān)鍵酶。研究表明SPHK1在多種實體瘤中高表達，通過SPHK1/S1P途徑促進腫瘤進展、影響預后。FTY720（芬戈莫德）是鞘氨醇的類似物，具有很強的免疫抑制活性。最近研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TY720可以抑制某些腫瘤細胞增殖，促進凋亡

2、。本實驗探討SPHK1在鼻咽癌中的表達及其與患者分期分級及預后的關(guān)系，以及SPHK1作為鼻咽癌潛在治療靶點的可能性。
　　研究方法:運用qRT-PCR，Western blot技術(shù)檢測SPHK1 mRNA和蛋白在新鮮鼻咽癌組織與鼻咽部炎癥組織中的表達情況;石蠟切片免疫組化檢測142鼻咽癌組織和10例鼻咽部炎癥組織中SPHK1的表達，并進行評分，運用SPSS統(tǒng)計學分析SPHK1表達與患者臨床病理參數(shù)和預后的關(guān)系。在細胞實驗中，鼻咽癌

3、細胞株CNE1和CNE2中轉(zhuǎn)染siRNA，運用qRT-PCR，Western blot檢測siRNA轉(zhuǎn)染后SPHK1的表達;運用CCK-8法檢測干擾SPHK1對細胞增殖的影響及FTY720對細胞活性和放療敏感性的影響;流式細胞術(shù)檢測干擾SPHK1和FTY720對細胞周期及凋亡的影響;運用SPHK1活性檢測ELISA試劑盒檢測FTY720對SPHK1酶活性的影響。
　　研究結(jié)果:qRT-PCR和Western blot檢測表明SPH

4、K1在新鮮鼻咽癌組織中的表達高于炎癥組織。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)142例鼻咽癌中93例(65.5％)SPHK1高表達，10例非腫瘤性組織中，SPHK1低表達或不表達?？ǚ綑z驗發(fā)現(xiàn)SPHK1高表達與臨床分期(P=0.001)、T分期(P=0.029)，N分期(P=0.002)、局部復發(fā)（P=0.018）和遠處轉(zhuǎn)移(P=0.001)相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank檢驗分析發(fā)現(xiàn)SPHK1高表達鼻咽癌患者較低表達者生存時間短(

5、P＜0.001)。多因素方差分析表明SPHK1是鼻咽癌患者獨立的預后因子(P＜0.05)。鼻咽癌細胞中轉(zhuǎn)染siRNA后，qRT-PCR和WB檢測轉(zhuǎn)染組細胞中SPHK1 mRNA和蛋白表達均降低。鼻咽癌細胞轉(zhuǎn)染si-SPHK1后抑制細胞增殖，阻滯細胞周期，促進細胞凋亡（均P＜0.05）。FTY720可以抑制SPHK1酶的活性，抑制鼻咽癌細胞的增殖，促進凋亡，增強細胞對放療的敏感性。
　　研究結(jié)論:我們的研究結(jié)果表明SPHK1在鼻咽癌