IFIT2在賁門腺癌中的表達及臨床意義.pdf

1、背景:賁門腺癌作為消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。由于賁門腺癌臨床上缺乏有效的早期診斷指標(biāo)，造成賁門腺癌患者大多數(shù)在就診時，腫瘤已發(fā)生轉(zhuǎn)移，臨床預(yù)后差。因此，深入研究賁門腺癌發(fā)生、發(fā)展中基因表達情況，對賁門腺癌的早期診斷、治療及預(yù)后有重要的意義。干擾素誘導(dǎo)基因2(IFN-induced protein withtetratricopeptide repeats2，IFIT2)作為IFIT家族的成員之一，具備了抵御病毒感染、免

2、疫調(diào)節(jié)、抵御細胞轉(zhuǎn)移和促細胞凋亡等生物學(xué)特性。相比IFIT2在抗病毒方面作用研究，該基因在抗腫瘤方面，報道較少，特別是在賁門腺癌未見報道。本研究旨在檢測IFIT2在賁門腺癌的表達情況及臨床意義。
　　目的:通過三種實驗方法檢測IFIT2在賁門腺癌及癌旁組織中的表達情況，以了解IFIT2在賁門腺癌發(fā)生、發(fā)展及診療中的作用。探討可否將IFIT2作為監(jiān)測賁門腺癌早期診斷、靶向治療及判斷預(yù)后的重要指標(biāo)之一。
　　方法:采用隨機抽樣的

3、方法，選取2012.02至2013.10間在河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院接受賁門癌根治術(shù)的賁門癌患者手術(shù)標(biāo)本60對（包括癌和癌旁組織），其中，男31例，女29例。通過免疫組織化學(xué)及Western blotting方法分別從定性及定量兩方面檢測IFIT2在賁門腺癌及癌旁組織中的表達差異，運用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)從mRNA層面來檢測IFIT2在賁門腺癌及癌旁組織中的表達差異。應(yīng)用SPASS17.0統(tǒng)計軟件，分析IFIT2在癌與癌旁表達差

4、異，進一步分析與賁門腺癌患者性別、臨床病理分化程度、臨床分期的關(guān)系。
　　結(jié)果:1.免疫組織化學(xué)的方法:顯示IFIT2在60例賁門腺癌的表達陽性率為25％(15/60)，在癌旁表達陽性率為70％(42/60)。IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的表達有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.001）;IFIT2陽性表達與腫瘤分化程度具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（x2，P=0.015）。IFIT2基因在癌組織中的表達及癌旁組織中的表達與患者性別無統(tǒng)計學(xué)意義（x

5、2，P=0.881，P=0.338），亦患者臨床分期(TNM)均無統(tǒng)計學(xué)意義(x2，P=0.563，P=0.884)。
　　2.Western-blotting方法驗證:我們在所收集的60對標(biāo)本中，隨機選取8對標(biāo)本，利用Western-blotting方法驗證IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的差異表達情況。Western-blotting結(jié)果先由凝膠成像系統(tǒng)（721BRO05922型，美國BIO-RAD公司）掃描，凝膠成像系統(tǒng)顯

6、示IFIT2蛋白大小約為60KDa，以蛋白大小為48 KDa的tublin作為內(nèi)參，再由凝膠圖像image軟件分析測得癌和癌旁表達條帶的灰度值，結(jié)果經(jīng)Wilcoxon符號秩和檢驗，提示IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的差異表達有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=2.474，P=0.018)。
　　3.實時熒光定量RT-PCR技術(shù)驗證:對所收集的60對標(biāo)本中，隨機選取30對標(biāo)本，通過primer5軟件設(shè)計引物，應(yīng)用實時熒光定量PCR儀對IFIT2基

7、因在30對賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中的差異表達情況的進行了擴增、分析、驗證，得出IFIT2基因在賁門腺癌和癌旁組織中經(jīng)PCR檢測的Ct值，以GAPDH為內(nèi)參，根據(jù)定量PCR結(jié)果的計算公式[1]計算賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中DNA的相對表達量2-△Ct，并且△Ct=（CtIFIT2—CtGAPDH）。經(jīng)t檢驗，IFIT2基因在癌組織和癌旁組織中的差異表達有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.954，P＜0.001)。
　　結(jié)論:1.IF