Survivin在宮頸鱗、腺癌的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、宮頸癌是全球最常見的婦科惡性腫瘤之一，其死亡率是女性腫瘤的第二位，全世界每年有近50萬新發(fā)病例，其中超過半數(shù)病例因此而死亡。近年資料顯示宮頸腺癌的發(fā)病率在逐年升高，尤其是在年輕婦女其發(fā)病率可達(dá)20％。宮頸腺癌的臨床及分子生物學(xué)特性有別于宮頸鱗癌，其患者的五年生存率較宮頸鱗癌患者低，預(yù)后差，因此對(duì)宮頸癌特別是對(duì)宮頸腺癌的研究具有重要意義。 從流行病學(xué)上看，導(dǎo)致宮頸癌的病因是多方面的，如HPV感染，抑癌基因和癌基因的平衡失調(diào)，細(xì)胞凋

2、亡機(jī)制的抑制等。其中腫瘤細(xì)胞的凋亡是當(dāng)前腫瘤研究的熱點(diǎn)。作為最近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins，IAP)家族最重要的成員survivin，因其具有以下四方面的特點(diǎn)不同于家族其他成員而倍受關(guān)注。(1)獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：IAP家族其他成員的結(jié)構(gòu)中均存在2到3個(gè)串聯(lián)的含有半胱氨酸/組氨酸的桿狀病毒IAP重復(fù)區(qū)(BIR)，相鄰的羧基末端有一個(gè)環(huán)指結(jié)構(gòu)，而survivin卻只包含一個(gè)氨基端Zn2+結(jié)合的

3、BIR結(jié)構(gòu)，無環(huán)指結(jié)構(gòu)，由一個(gè)40個(gè)氨基酸組成的α螺旋結(jié)構(gòu)取代。此螺旋結(jié)構(gòu)富含疏水基團(tuán)，能與細(xì)胞紡錘體上的微管結(jié)合，為survivin抗凋亡根本之所在，無此結(jié)構(gòu)的變異體就無抑制凋亡的功能。(2)特殊的組織分布：只在胚胎及胎兒期和幾乎所有的腫瘤表達(dá)，而在成年人正常組織無表達(dá)或低表達(dá)。(3)明顯的抗凋亡作用。(4)具有利用survivin反義寡核苷酸、survivin突變體進(jìn)行的基因治療、免疫治療等多方面的治療價(jià)值。因此研究survivin

4、在宮頸癌中的表達(dá)具有一定的前沿性和實(shí)用性。 研究?jī)?nèi)容：(1)survivin在宮頸癌與慢性宮頸炎組織中表達(dá)的檢測(cè);(2)宮頸鱗癌和宮頸腺癌survivin表達(dá)的檢測(cè)，此前，尚未見到有足夠樣本數(shù)量的survivin在宮頸鱗癌和宮頸腺癌表達(dá)對(duì)比及相關(guān)臨床意義的報(bào)道;(3)分析survivin在宮頸癌中的表達(dá)與臨床病理特征的相互關(guān)系，找出與預(yù)后相關(guān)的指標(biāo);(4)分析了survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)與宮頸癌病理類型、淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤大小間

5、的相關(guān)性，提出了survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)可能與腫瘤細(xì)胞的增殖、分裂活性較survivin陽性表達(dá)相關(guān)性更加密切，它可反映腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性，預(yù)示不良預(yù)后的新觀點(diǎn)。 資料：選擇1997年～2004年間山東腫瘤醫(yī)院病理科經(jīng)活檢和手術(shù)切除宮頸癌組織蠟塊標(biāo)本60例，慢性宮頸炎10例，所有病例均為病理診斷確診(根據(jù)Maier和Norris提出的診斷標(biāo)準(zhǔn)確定宮頸原發(fā)腺癌)且患者具有完整病理資料。每個(gè)蠟塊標(biāo)本連續(xù)4um切片，留1張行HE

6、染色用做組織學(xué)分類，另備6μm切片用于此項(xiàng)研究之后的PCR與survivin在宮頸癌表達(dá)相關(guān)性的研究之用。設(shè)已知陽性對(duì)照及陰性對(duì)照，所有切片采用同批試劑檢測(cè)。隨訪方式為電話、信訪及門診定期復(fù)查方式進(jìn)行。在60例宮頸癌患者中腺癌30例(腺癌16例，腺鱗癌5例，透明細(xì)胞癌7例，子宮內(nèi)膜樣腺癌2例。)鱗癌30例。年齡(26～67)歲，平均48.3歲。大于48歲的有36例，小于48歲的有24例。病理分級(jí)：G1級(jí)26例，G2～G3級(jí)34例。根據(jù)1

7、995年再次修訂后的國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)提出的分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期15例。手術(shù)60例，行放療42例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的24例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的36例。 實(shí)驗(yàn)方法：該組實(shí)驗(yàn)方法采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶連接免疫組化方法(SP法)，羊抗人survivin單克隆抗體及SP試劑盒均為福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司產(chǎn)品，操作步驟按說明書進(jìn)行，設(shè)陽性對(duì)照及陰性對(duì)照。所有切片采用同批試劑檢測(cè)，隨訪方式為電

8、話、信訪及門診定期復(fù)查方式進(jìn)行。 免疫組化結(jié)果判定：在組織切片中顯示胞質(zhì)或胞核染成淡黃色至棕黃色者為陽性細(xì)胞標(biāo)志，記錄胞核的陽性數(shù)量和比例及程度。參照Lgaws等方法，每張切片在400倍顯微鏡下順序找5～10個(gè)視野，每個(gè)視野數(shù)100～200個(gè)細(xì)胞共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算每張切片上陽性細(xì)胞表達(dá)的百分?jǐn)?shù)及胞質(zhì)、胞核的陽性細(xì)胞表達(dá)的百分?jǐn)?shù)。將陽性細(xì)胞數(shù)按其數(shù)量及顯色強(qiáng)度分為3級(jí)：表達(dá)弱陽性(+)，即陽性細(xì)胞數(shù)＜10％，顯色強(qiáng)度為淡黃色

9、或僅個(gè)別細(xì)胞呈黃至棕黃色；表達(dá)強(qiáng)陽性(+++)，即陽性細(xì)胞數(shù)＞60％，多數(shù)細(xì)胞呈黃至棕黃色；表達(dá)中度陽性(++)，即陽性細(xì)胞數(shù)及顯色強(qiáng)度介于弱陽性與強(qiáng)陽性之間。若陽性細(xì)胞少，但著色較強(qiáng)相應(yīng)增加一級(jí)，陽性結(jié)果有兩位以上的觀察者觀察，凡顯色強(qiáng)度上背景無明顯差別者為陰性。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用χ2檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1.Survivin基因在慢性宮頸炎與宮頸癌中的陽性表達(dá)Survivin基因在慢性宮頸炎組織中的表達(dá)10例中只有1例陽性，

10、9例陰性(1/10)，明顯低于survivin宮頸腺癌中的表達(dá)80％(24/30)及宮頸鱗癌中的表達(dá)56.67％(17/30)，差異顯著(P＜0.01)。 2.Survivin基因在宮頸鱗癌與宮頸腺癌中的陽性表達(dá)Survivin在宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)為56.67％(17/30)，在宮頸腺癌中的陽性衷達(dá)為80％(24/30)，差異顯著(p＜0.05)。 3.宮頸鱗癌、宮頸腺癌中survivin基因表達(dá)與臨床病理相關(guān)性Sur

11、vivin基因的陽性表達(dá)與患者的年齡、腫瘤的大小、病理分級(jí)、臨床分期無相關(guān)性(P＞0.05)，但與患者的病理分類有關(guān)，survivin在宮頸腺癌中呈現(xiàn)高表達(dá)，在其中四種病理分型中，又以腺癌為最高(15/16)(p＜0.05)、與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(p＜0.01)。 4.Survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)與臨床病理相關(guān)性我們?cè)趕urvivin陽性表達(dá)中注意到(1)Survivin不僅在胞質(zhì)中定位表達(dá)，而且還在胞核中定位表達(dá)。(2)surv

12、ivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)與病理類型相關(guān)，在腺癌的表達(dá)為最高，以宮頸腺癌中的腺癌類型為最高(11/16)，差異顯著(p＜0.05)。(3)survivin陽性表達(dá)與腫瘤大小無關(guān)，但survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)腫瘤大小相關(guān)，差異顯著(p＜0.05)。(4)Survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(p＜0.01)。 結(jié)論： 1.Survivin在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于在慢性宮頸炎的陽性表達(dá)率，說明sur

13、vivin可能通過抑制宮頸癌細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖及血管形成等方式，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起作用。研究驗(yàn)證了survivin只特異性表達(dá)于腫瘤組織，而在成人正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)的特性。 2.Survivin在宮頸腺癌的陽性表達(dá)率高于宮頸鱗癌的陽性表達(dá)，差異顯著。宮頸鱗癌和宮頸腺癌各30例的survivin的陽性表達(dá)檢測(cè)對(duì)比，是具有一定樣本資料的檢測(cè)結(jié)果。與Yoshida等用免疫組化法檢測(cè)宮頸鱗癌、宮頸腺癌各17例的s

14、urvivin的陽性表達(dá)結(jié)果相符。Survivin的陽性表達(dá)具有的意義，與宮頸腺癌具有預(yù)后差、易復(fù)發(fā)、對(duì)放化療不敏感等特性相吻合，說明其中有一定的內(nèi)在聯(lián)系，其機(jī)理有待于進(jìn)一步的研究探索。 3.Survivin陽性表達(dá)在腫瘤細(xì)胞病理分類、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面有相關(guān)性，而與腫瘤的大小、病理分級(jí)、年齡無關(guān)，說明survivin陽性表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展預(yù)后中具有顯著相關(guān)性。 4.Survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)與宮頸癌腫瘤的大小、

15、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及宮頸癌病理類型有關(guān)，還可能與患者的平均生存率呈負(fù)相關(guān)。上述臨床特性應(yīng)取決于survivin在細(xì)胞中的表達(dá)具有嚴(yán)格的細(xì)胞周期依賴性及survivin在有絲分裂過程中不同時(shí)期的分布定位等特性，Survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)說明其細(xì)胞增殖、分裂活躍。 Survivin陽性表達(dá)特別是survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)可成為宮頸癌早期診斷、早期治療、評(píng)價(jià)療效與預(yù)后的有價(jià)值的檢測(cè)指標(biāo)，survivin胞核強(qiáng)陽性表達(dá)可能與宮頸癌臨