PI3K-自噬途徑介導(dǎo)apelin-13促H9c2心肌細(xì)胞IL-8分泌.pdf

1、目的:研究apelin/APJ系統(tǒng)對(duì)大鼠H9c2心肌細(xì)胞中白細(xì)胞介素8分泌的影響，并進(jìn)一步探索PI3K-自噬途徑參與H9c2大鼠心肌細(xì)胞白細(xì)胞介素8分泌的調(diào)控機(jī)制。
　　方法:
　　1.序列比對(duì)法：預(yù)測(cè)apelin的受體APJ與白細(xì)胞介素8受體CXCR的同源性；
　　2. ELISA法：檢測(cè)培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素8（IL-8）含量；
　　3.WesternBlot：檢測(cè)培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞A

2、PJ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表達(dá)；檢測(cè)PI3K、Akt、ERK1/2磷酸化水平；
　　4.生化檢測(cè)：檢測(cè)培養(yǎng)大鼠 H9c2心肌細(xì)胞分泌的乳酸脫氫酶（LDH）和天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）水平。
　　結(jié)果：
　　1.Apelin的受體APJ與白細(xì)胞介素8受體CXCR同源性為47％；
　　2.培養(yǎng)大鼠 H9c2心肌細(xì)胞在基礎(chǔ)情況下能分泌 IL-8；apelin-13（0-1μM）孵育大鼠H9c2心肌細(xì)胞（0-2

3、4h）促進(jìn)IL-8分泌，濃度為0.01μM、時(shí)間為6小時(shí)時(shí)促分泌作用達(dá)峰值；與陰性對(duì)照組比較，shRNA干擾沉默 APJ表達(dá)后能抑制apelin-13誘導(dǎo)的培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞IL-8分泌；
　　3.孵育apelin-13（2μM）處理培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞4小時(shí)可以上調(diào)培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞PI3K、Akt和ERK1/2磷酸化水平；
　　4. PI3K特異性抑制劑 LY294002（25μM）、 Akt特異性抑制劑

4、1701-1（10μM）和 ERK1/2特異性抑制劑 PD98059（10μM）均可以抑制培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞中apelin-13誘導(dǎo)的IL-8的分泌；
　　5.Apelin-13濃度依賴性（0-1μM）和時(shí)間依賴性（0-24h）促進(jìn)培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞中自噬標(biāo)志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表達(dá)；
　　6.PI3K特異性抑制劑 LY294002（25μM）和 Akt特異性抑制劑1701-1（10μM）可以抑制