leptin調(diào)節(jié)下丘腦神經(jīng)肽Y分泌的研究.pdf

1、盡管有大量的證據(jù)支持leptin調(diào)節(jié)生殖功能的角色,然而leptin究竟是直接還是間接調(diào)節(jié)下丘腦—垂體—性腺軸,仍舊需要更多的工作去闡明.因此,本實(shí)驗(yàn)研究leptin對(duì)生殖軸中下丘腦的可能作用,期望通過觀察leptin對(duì)下丘腦神經(jīng)肽Y神經(jīng)元(Neuropeptide Y, NPY)表達(dá)的影響,能夠初步探討leptin調(diào)控生殖的可能作用機(jī)理,為leptin的臨床應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù).研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下:一、obR與NPY在小鼠下丘腦的共

2、表達(dá)目的:leptin是連接營(yíng)養(yǎng)與生殖的代謝信號(hào),在生殖軸中發(fā)揮重要作用.由于未能發(fā)現(xiàn)obR和obRmRNA與GnRH神經(jīng)元在中樞的共性表達(dá),大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為leptin是間接作用于GnRH神經(jīng)元影響其分泌,而NPY是目前研究最多的參與能量平衡和神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控的重要調(diào)質(zhì),推測(cè)NPY可能介導(dǎo)了leptin和GnRH神經(jīng)元之間的調(diào)節(jié)作用.所以實(shí)驗(yàn)中我們首先觀察obR與NPY在小鼠下丘腦的分布,然后進(jìn)一步觀察兩者在下丘腦的是否有共存情況,并以此

3、作為下一步實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的依據(jù).二、側(cè)腦室注射瘦素對(duì)小鼠下丘腦神經(jīng)肽Y表達(dá)的影響目的:由于沒有觀察到obR與GnRH神經(jīng)元在中樞的共性表達(dá),因而大多學(xué)者更傾向于leptin通過其他下丘腦神經(jīng)肽間接作用于GnRH神經(jīng)元而影響其分泌的觀點(diǎn).從前面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,已知在小鼠下丘腦ARC區(qū)NPY神經(jīng)元上有obR的表達(dá),結(jié)合其他學(xué)者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們認(rèn)為NPY神經(jīng)元在其中起到中間介質(zhì)的重要作用.本實(shí)驗(yàn)采用側(cè)腦室微量注射Leptin,觀察在注射不同時(shí)間后Lep

4、tin對(duì)小鼠血清卵泡刺激素(Follicle stimulatinghormone,FSH)與黃體生成素(luteinizing hormone,LH)的影響,以及同步的下丘腦NPY神經(jīng)元表達(dá)的影響,期望能得知Leptin究竟是通過抑制還是促進(jìn)NPY神經(jīng)元的表達(dá)而影響GnRH神經(jīng)元的分泌.并且期望通過研究Leptin對(duì)下丘腦NPY神經(jīng)元的影響,能夠初步探討leptin調(diào)節(jié)GnRH神經(jīng)元分泌的作用機(jī)理,為L(zhǎng)eptin的臨床應(yīng)用進(jìn)行前期的基

5、礎(chǔ)研究.三、Leptin對(duì)下丘腦NPY神經(jīng)元表達(dá)影響的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)康?神經(jīng)組織的培養(yǎng)歷史自最初的組織塊培養(yǎng)發(fā)展至現(xiàn)在的分散細(xì)胞培養(yǎng)和單一細(xì)胞培養(yǎng)已有九十多年的歷史.由于體外培養(yǎng)具有易于控制實(shí)驗(yàn)條件和因素,易獲得活體觀察結(jié)果等優(yōu)點(diǎn),并且與分子生物學(xué)等技術(shù)相結(jié)合,成為研究神經(jīng)內(nèi)分泌的有效實(shí)驗(yàn)方法.下丘腦由于核團(tuán)多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜,在體研究有一定難度,因而許多學(xué)者建立了體外培養(yǎng)技術(shù).從前期的實(shí)驗(yàn)研究中得知leptin在刺激OEP小鼠血清FSH和LH濃