神經(jīng)肽Y對(duì)脂肪細(xì)胞增殖及分化的影響.pdf

1、目的:
　　1.觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞、人脂肪干細(xì)胞(humanadipose-derived stem cells，hADSCs)正常培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化過(guò)程中的形態(tài)變化，繪制其生長(zhǎng)曲線。
　　2.研究不同濃度NPY對(duì)3T3-L1細(xì)胞及hADSCs增殖及分化的影響，初步探討NPY與白色脂肪組織形成的關(guān)系。
　　方法:
　　1.3T3-L1細(xì)胞及hADSCs的復(fù)蘇、傳代、培養(yǎng)、生長(zhǎng)曲線的繪制及誘導(dǎo)分化;采用經(jīng)典的激

2、素雞尾酒誘導(dǎo)法誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞、hADSCs分化為成熟脂肪細(xì)胞，油紅O染色觀察脂滴情況。
　　2.不同濃度NPY(10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、10-14M、10-15M)作用于3T3-L1細(xì)胞、hADSCs24h，采用MTT法檢測(cè)NPY對(duì)脂肪細(xì)胞增殖的影響。
　　3.不同濃度NPY(10-7M、10-9M、10-11M)誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞、hA

3、DSCs分化，油紅O染色觀察NPY誘導(dǎo)分化過(guò)程中脂滴的形成及變化情況。
　　4.采用western blot檢測(cè)NPY誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中PPARγ、C/EBPα的蛋白表達(dá)水平。
　　5.采用western blot檢測(cè)NPY誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化成熟后白色脂肪組織特異性標(biāo)志Cidec、RIP140的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.3T3-L1細(xì)胞、hADSCs正常培養(yǎng)時(shí)為梭狀細(xì)胞，經(jīng)典的激素雞尾酒誘導(dǎo)法能成功誘

4、導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞、hADSCs分化為成熟脂肪細(xì)胞，油紅O染色可見(jiàn)脂滴呈橘紅色。
　　2.不同濃度NPY作用3T3-L1細(xì)胞、hADSCs24h后，與無(wú)血清培養(yǎng)基組（陰性對(duì)照組）比較，10-6M～10-15M NPY促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞增殖;10-11M～10-14M NPY促進(jìn)hADSCs增殖，10-7M、10-9M、10-10M NPY抑制hADSCs增殖。
　　3.NPY誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞、hADSCs分化過(guò)程中，油

5、紅O染色觀察到10-7M、10-9M、10-11M NPY均誘導(dǎo)脂滴形成、脂質(zhì)合成、脂肪細(xì)胞分化。
　　4.Westernblot結(jié)果顯示10-7M、10-9M、10-11M NPY都能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化早期轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、C/EBPα蛋白表達(dá)增加。
　　5.Western blot結(jié)果還說(shuō)明10-7M、10-9M、1011M NPY都能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化成熟后白色脂肪組織特異性標(biāo)志Cidec（小鼠的稱FSP-27）、RIP