煙酰胺對小鼠前體脂肪細(xì)胞增殖分化及能量代謝的影響.pdf

1、本文以生長發(fā)育正常、健康狀況良好的6周齡雌性昆明小鼠為實驗動物，采用脂肪細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)分離培養(yǎng)小鼠前體脂肪細(xì)胞，以不同濃度的煙酰胺(Nicotinamide，NAM)處理細(xì)胞，分析了NAM對小鼠前體脂肪細(xì)胞增殖分化及能量代謝的影響，并比較了不同濃度NAM對前脂肪細(xì)胞分化過程中沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Sirtuintype1，Sirt1)及過氧化物酶增殖物活化受體γ(Peroxisomeproliferator-activatedrecep

2、tor-gamma，PPARγ)基因mRNA表達(dá)的調(diào)控，為進(jìn)一步闡明NAM在前體脂肪細(xì)胞增殖分化及能量代謝中的作用機(jī)理提供理論依據(jù)。
　　 通過細(xì)胞形態(tài)觀察、噻唑藍(lán)比色法（Methylthiazolyltetrazolium，MTT）檢測了不同濃度NAM對小鼠前體脂肪細(xì)胞增殖活力的影響。結(jié)果表明，NAM能促進(jìn)小鼠前體脂肪細(xì)胞的增殖活力，200μmol/L的NAM促增殖作用較100，300，400，500μmol/L四種濃度顯著(

3、P＜0.01);100、300，400μmol/L的NAM，誘導(dǎo)增殖效果較低(P＞0.05);而500μmol/L則部分抑制細(xì)胞增殖(P＞0.05)。
　　 通過細(xì)胞形態(tài)觀察、油紅O染色等方法分析不同濃度NAM對小鼠前體脂肪細(xì)胞分化的影響。結(jié)果表明:低濃度NAM（100～400μmol/L）可促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂肪生成量，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化，200μmol/LNAM作用效果顯著(P＜0.01)，而高濃度NAM（500μmo

4、l/L）則對細(xì)胞的分化起抑制作用(P＞0.05)。
　　 利用Griss法，ATPase檢測試劑盒，羅丹明-123熒光染色法等檢測200μmo/L，500μmol/L兩種濃度的NAM對分化24h的前體脂肪細(xì)胞中一氧化氮(Nitricoxide，NO)生成量、三磷酸腺苷酶(Adenosinetriphosphatase，ATPase)活性及線粒體數(shù)目的影響。結(jié)果顯示:低濃度NAM(200μmo/L)可使NO生成量減少，提高ATPa

5、se的活性，增加線粒體的數(shù)目(P＜0.01);而高濃度NAM（500μmol/L）能促進(jìn)NO的生成，抑制ATPase的活性，使線粒體的數(shù)目減少(P＞0.05)。
　　 利用實時熒光定量PCR支術(shù)(Real-timefluorescentquantitativePCR，F(xiàn)Q-PCR)，檢測200μmo/L，500μmol/L兩種濃度的NAM對分化24h的前體脂肪細(xì)胞Sirt1和PPARγmRNA表達(dá)的影響。結(jié)果表明:低濃度NAM(