阿司匹林對(duì)小鼠前成骨細(xì)胞增殖、分化、礦化的影響及可能作用機(jī)制.pdf

1、背景：骨質(zhì)疏松癥是以骨密度減少、骨顯微結(jié)構(gòu)改變、骨骼脆性增加、易發(fā)生骨折為特征的慢性疾病，以絕經(jīng)后女性及老年男性發(fā)病率較高，至今為止關(guān)于骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制仍不甚清楚。阿司匹林作為解熱鎮(zhèn)痛藥及抗血小板藥物廣泛用于臨床，近年來(lái)多項(xiàng)研究提示阿司匹林具有抗骨質(zhì)疏松作用，然而具體機(jī)制尚不明確。OPG/RANKL/RANK信號(hào)通路因其在成骨細(xì)胞-破骨細(xì)胞偶聯(lián)中處于重要地位，被認(rèn)為是骨質(zhì)疏松發(fā)病過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)。
　　目的：研究阿司匹林對(duì)小鼠

2、前成骨細(xì)胞MC3T3的增殖、分化及礦化的影響，探討阿司匹林通過(guò)OPG/RANKL/RANK信號(hào)通路影響小鼠前成骨細(xì)胞的可能作用機(jī)制。
　　方法：以小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別以不同濃度（0、0.25、0.5、1、1.5、2、5、10mmol/L）的阿司匹林誘導(dǎo)液進(jìn)行培養(yǎng)：1、通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度阿司匹林對(duì)MC3T3細(xì)胞增殖的影響；2、通過(guò)堿性磷酸酶染色及定量分析，檢測(cè)不同濃度阿司匹林的促成骨分化作用；3、通過(guò)茜素

3、紅鈣結(jié)節(jié)染色，檢測(cè)不同濃度阿司匹林的促礦化作用；4、通過(guò)蛋白印跡及實(shí)時(shí)PCR技術(shù)，探究阿司匹林作用于MC3T3細(xì)胞的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：1、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示低濃度阿司匹林藥物組（0.25、0.5、1、1.5、2mmol/L）OD值較對(duì)照組無(wú)差異（P>0.05），中高濃度阿司匹林組（5-10mmol/L） OD值較對(duì)照組明顯減低（P＜0.01）；2、堿性磷酸酶染色結(jié)果示1.5mmol/L阿司匹林藥物組堿性磷酸酶陽(yáng)性顆粒較其他實(shí)驗(yàn)

4、組最為顯著；3、堿性磷酸酶定量分析結(jié)果示在第7、10、14天各濃度阿司匹林藥物組（0.5、1、1.5、2、3mmol/L）堿性磷酸酶含量均較對(duì)照組均明顯升高（P<0.01），其中以1.5mmol/L阿司匹林組最顯著（P<0.01）；4、茜素紅染色結(jié)果示各濃度阿司匹林藥物組（0.5、1、1.5、2、3mmol/L）鈣結(jié)節(jié)數(shù)量及面積均較對(duì)照組增多，其中以1.5mmol/L阿司匹林組增多最為顯著；5、蛋白印跡結(jié)果示1.5mmol/L阿司匹林組

5、OPG蛋白及Col1a蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著增加（P＜0.01），RANKL蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著減少（P＜0.01）。6、實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)結(jié)果提示1.5mmol/L阿司匹林組OPGmRNA表達(dá)升高、RANKLmRNA表達(dá)減低最為顯著（P＜0.01）。
　　結(jié)論：1、提示低濃度阿司匹林對(duì)MC3T3細(xì)胞增殖無(wú)影響，中高濃度阿司匹林對(duì)MC3T3細(xì)胞增殖起抑制作用；2、1.5mmol/L阿司匹林組促成骨、促礦化作用較其他濃度藥物組及對(duì)照組最顯