成骨細胞特異性識別多肽對人成骨細胞增殖和礦化影響的實驗研究.pdf

1、研究：以人顱骨成骨細胞為靶細胞，人牙齦成纖維細胞為吸附細胞對噬菌體十二肽庫進行全細胞差減篩選，獲得與人成骨細胞特異性結(jié)合多肽，其氨基酸序列為：VLAVPWSEPGYL。本研究的目的旨在探討人成骨細胞特異性識別多肽對人成骨細胞增殖和礦化功能的影響，摸索并確定成骨細胞特異性識別多肽體外促進人成骨細胞增殖礦化的最佳有效濃度，為該特異性多肽的進一步研究及應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　第一部分：MTT法檢測人成骨細胞的增殖

2、
　　體外常規(guī)培養(yǎng)人顱骨成骨細胞，用α-MEM培養(yǎng)基將成骨細胞特異性識別多肽配制成五種不同的濃度，分為5個實驗組（10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L）以及空白對照組，分別于4，7 d進行MTT檢測，獲得的實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果表明:在此濃度范圍的成骨細胞特異性識別多肽能促進人顱骨成骨細胞的增殖（P<0.05），其最佳有效作用濃度是10-5mol/L。
　　第二部分：堿性磷酸酶（alk

3、aline phosphatase, ALP）活性檢測
　　體外常規(guī)培養(yǎng)人顱骨成骨細胞，用α-MEM培養(yǎng)基將成骨細胞特異性識別多肽配制成五種不同的濃度，分為5個實驗組（10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L）以及空白對照組，分別于第4、7 d取出細胞，按照ALP檢測試劑盒以及BCA蛋白法步驟進行檢測。將ALP活性除以測得的細胞總蛋白即可得到單位蛋白含量的相對ALP活性，獲得的實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　

4、結(jié)果表明：在此濃度范圍的成骨細胞特異性識別多肽能促進人顱骨成骨細胞ALP活性的表達（P<0.05），其最佳有效作用濃度是10-4mol/L。
　　第三部分：茜素紅染色及半定量分析檢測人成骨細胞鈣化程度
　　體外常規(guī)培養(yǎng)人顱骨成骨細胞，用α-MEM培養(yǎng)基將成骨細胞特異性識別多肽配制成五種不同的濃度，分為5個實驗組（10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L）以及空白對照組，分別于第14、21 d取出細胞，漂洗，

5、固定，茜素紅染色，掃描儀掃描照片。每孔加入氯化十六烷基吡啶，待茜素紅溶解后，測得吸光度值，獲得的實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果表明：在此濃度范圍的成骨細胞特異性識別多肽能促進成骨細胞的鈣鹽沉積，半定量分析結(jié)果顯示在濃度10-5mol/L時，吸光度（OD）值最高，但實驗組與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義。
　　第四部分：RT-QPCR檢測人成骨細胞骨鈣素（OCN）mRNA的表達
　　體外常規(guī)培養(yǎng)人顱骨成骨細胞，用α-ME

6、M培養(yǎng)基將成骨細胞特異性識別多肽配制成五種不同的濃度，分為5個實驗組（10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L）以及空白對照組，分別于于第14、21 d取出細胞，提取RNA進行逆轉(zhuǎn)錄，使用RT-QPCR檢測試劑盒檢測，獲得的實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果表明：在此濃度范圍的成骨細胞特異性識別多肽能促進成骨細胞OCNmRNA的表達（P<0.05），其最佳有效作用濃度10-6mol/L。
　　總結(jié)：成骨細胞