玉米發(fā)育胚乳的酵母雙雜交cDNA文庫(kù)及誘餌載體的構(gòu)建.pdf

1、玉米是主要的糧食、飼料作物和工業(yè)原料，在世界和我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上均具有重要的作用。我國(guó)在玉米的傳統(tǒng)育種方面已經(jīng)取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。隨著植物分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)在提高玉米的產(chǎn)量和品質(zhì)等方面發(fā)揮著重要的作用。酵母雙雜交系統(tǒng)使該技術(shù)的應(yīng)用更加便捷。應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)可以很方便的研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)與RNA，蛋白質(zhì)與小分子等的相互作用。而獲得高質(zhì)量的cDNA文庫(kù)則是能否篩選到與其相互作用蛋白的前提。 利用SMART(switch

2、ing mechanism at 5’end of RNA transcript)技術(shù)，通過(guò)同源重組的方法，在酵母菌株AH109中構(gòu)建玉米胚乳全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)。以胚乳mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。再在DNA聚合酶作用下，通過(guò)長(zhǎng)距離PCR，擴(kuò)增雙鏈cDNA(ds cDNA)。純化的ds cDNA與線性化pGADT7-Rec質(zhì)粒載體共同轉(zhuǎn)化酵母菌株感受態(tài)AH109，經(jīng)胞內(nèi)同源重組形成環(huán)狀文庫(kù)質(zhì)粒。應(yīng)用營(yíng)養(yǎng)缺陷的方法在SD/-Le

3、u平板上篩選并收集所有克隆從而獲得酵母雙雜交的玉米胚乳cDNA文庫(kù)。所獲得的文庫(kù)的轉(zhuǎn)化效率為1．8×10<'8>轉(zhuǎn)化子/3 μg pGADT7-Rec，從而在酵母菌株AH109成功構(gòu)建了用于酵母雙雜交的玉米胚乳eDNA文庫(kù)。 淀粉不僅是食品的主要組成部分，還是一種重要的工業(yè)原料，因此改良淀粉品質(zhì)一直都是遺傳育種的研究重點(diǎn)。淀粉合成酶(starch synthase，ss)對(duì)淀粉結(jié)構(gòu)的形成起著非常重要的作用，因此對(duì)ss的深入研究有