月季“月月紅”酵母單雜交cDNA文庫及RrMYB7誘餌載體構(gòu)建.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子通過激活或者抑制基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)來調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的各種生理生化過程，植物中包含許多的轉(zhuǎn)錄因子家族，MYB基因家族就是其中一類。多年來人們對植物體內(nèi)的MYB轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了大量的研究，分析其蛋白的結(jié)構(gòu)及功能，現(xiàn)有研究表明MYB蛋白在植物生長發(fā)育的多個(gè)階段包括植物次生代謝、植物細(xì)胞形態(tài)建成以及植物抗逆脅迫應(yīng)答等方面都起著重要作用。目前，對MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究大部分還停留在分析其生理功能或單個(gè)MYB基因的作用方面，對于MYB蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研

2、究、MYB基因家族成員間的互作以及MYB基因與其它轉(zhuǎn)錄因子家族之間的作用機(jī)制還缺乏了解。探討多個(gè)基因甚至整個(gè)MYB家族基因間的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)有助于在整體水平上利用MYB基因?qū)χ参镞M(jìn)行定向改良，這將成為今后對MYB基因家族的研究重點(diǎn)。
　　為了探索MYB基因家族的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，可以運(yùn)用酵母雙雜交及酵母單雜交技術(shù)來找尋MYB蛋白及MYB基因啟動(dòng)子的互作蛋白編碼序列。我們選擇可能與植物生長與開花相關(guān)的MYB基因家族成員MYB7作為研究對象

3、，以周年開花不斷的薔薇科植物“月月紅”(Rosachinensis'Slater'scrimson China')作為植物材料，構(gòu)建了“月月紅”酵母單雜交cDNA文庫和MYB7酵母雙雜交誘餌載體PGBKT7-MYB7，并運(yùn)用FPNI-PCR方法擴(kuò)增出MYB7基因上游1.86kb長度序列，為后期的酵母單雜交和酵母雙雜交cDNA文庫篩選工作做出鋪墊。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　1.以實(shí)驗(yàn)室基地大棚的“月月紅”花瓣與花芽為植物材料構(gòu)建

4、“月月紅”酵母單雜交cDNA文庫，通過檢測此文庫的轉(zhuǎn)化效率及插入片段長度來評價(jià)文庫質(zhì)量。此文庫轉(zhuǎn)化效率為1.4×106，插入片段長度為800bp-1000bp之間，有少數(shù)自連及多片段插入情況。
　　2.以實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建好的MYB7超量表達(dá)載體PMV-RrMYB7質(zhì)粒為模版，克隆玫瑰MYB7基因cDNA序列全長，根據(jù)PGBKT7誘餌載體選擇NcoI和BamHI酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)引物構(gòu)建酵母雙雜交誘餌載體PGBKT7-MYB7，將構(gòu)建好的誘