酵母雙雜交RRS篩選系統(tǒng)中輪狀病毒外殼蛋白VP4誘餌載體的構(gòu)建.pdf

1、酵母雙雜交技術(shù)自創(chuàng)立以來已成為研究蛋白之間相互作用的重要方法。傳統(tǒng)的酵母雙雜交所研究的蛋白間相互作用是在細(xì)胞核內(nèi)完成的，而近年來發(fā)展起來的酵母雙雜交衍生系統(tǒng)---Ras募集系統(tǒng)(RRS)，能夠?qū)⒌鞍组g相互作用的研究定位在細(xì)胞膜上，更具備了靈敏度高、假陽性少等突出優(yōu)點(diǎn)。在本研究中，我們利用了一對(duì)已知蛋白之間的相互作用來驗(yàn)證RRS篩選系統(tǒng)，以期將此篩選系統(tǒng)更廣泛地運(yùn)用于其他蛋白間相互作用的研究以及相互作用蛋白的釣取。 輪狀病毒(RV

2、)腸炎及其腸道外并發(fā)癥是威脅兒童健康的重要疾病。RV 與其宿主細(xì)胞表面受體的結(jié)合是病毒感染的第一必備步驟，因此，明確RV受體性質(zhì)，對(duì)該病的預(yù)防和治療有十分重要的意義?，F(xiàn)有研究提示，RV外殼蛋白VP4是病毒吸附受體的主要配體蛋白。在本研究中，我們采用 RT-PCR法擴(kuò)增RV外殼蛋白VP4編碼基因并將其克隆到Met425-Myc-Ras載體上，構(gòu)建成適合于RRS篩選系統(tǒng)的誘餌質(zhì)粒并排除了誘餌的自激活作用，表明我們可以將該誘餌質(zhì)粒用于RRS篩