在昆蟲細胞中表達輪狀病毒我國地方株VP4并構(gòu)建病毒樣顆粒.pdf

1、該研究的目的是:用基因重組方式表達輪狀病毒中國地方株VP4,為嬰幼兒輪狀病毒感染性腹瀉的防治奠定基礎(chǔ).該研究第一部分工作是在昆早細胞中表達輪狀病毒P1A型中國地方株VP4.主要方法是利用DNA重組技術(shù),將A組輪狀病毒P1A型中國地方株全長VP4基因的cDNA片段亞克隆到表達供體質(zhì)粒中,含VP4基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coliDH10B<,AC>感受態(tài)細胞,篩選含VP4基因的重組Bacmid,轉(zhuǎn)染Sf9細胞并表達重組VP4.第二部分工作是在

2、昆蟲細胞中構(gòu)建針對中國流行型別的輪狀病毒樣顆粒.結(jié)構(gòu)蛋白VP2、VP4、VP6的桿狀病毒重組體共感染Sf9昆蟲細胞(MOI=0.5),重組蛋白自行組裝成VLPs,氯化銫密度梯度離心純化表達產(chǎn)物,其蛋白定量分析的結(jié)果為172μg/3×10<'8>細胞.作者的研究表明:在桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統(tǒng)中表達輪狀病毒中國地方株VP4并構(gòu)建VLPs(2/4/6)是切實可行的.這一結(jié)果為在中國制備重組輪狀病毒樣顆粒(2/4/6/7)奠定基因,可望應(yīng)用