酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法在輪狀病毒檢測(cè)及輪狀病毒中和試驗(yàn)中的應(yīng)用.pdf

1、輪狀病毒是引起小兒腹瀉的主因。全球每年有超過(guò)1.25億嬰幼兒腹瀉是由輪狀病毒引起的,并造成超過(guò)60萬(wàn)嬰幼兒的死亡,且大部分死亡病例都發(fā)生在不發(fā)達(dá)的亞非國(guó)家。針對(duì)輪狀病毒的治療目前還沒(méi)有特別有效的治療藥物,因此預(yù)防輪狀病毒就顯得至關(guān)重要;而預(yù)防輪狀病毒最有效的方法就是研制輪狀病毒疫苗,因此研制安全、廣譜、高效的輪狀病毒疫苗就成為當(dāng)今各國(guó)政府及世界衛(wèi)生組織(WHO)極為重要的任務(wù)。目前TCID50法是常用的檢測(cè)輪狀病毒感染力和輪狀病毒中和抗

2、體的方法,但由于TCID50法耗時(shí)長(zhǎng)、主觀(guān)誤差大、工作量大等原因,限制其在大規(guī)模的篩選和試驗(yàn)中應(yīng)用。因此建立一種快速、高效、準(zhǔn)確的輪狀病毒和輪狀病毒中和抗體的檢測(cè)方法對(duì)輪狀病毒的病毒學(xué)研究和輪狀病毒疫苗的開(kāi)發(fā)都具有重要的作用和意義。
　　 本論文建立了輪狀病毒的分離,鑒定和擴(kuò)大培養(yǎng)的方式,通過(guò)收集和分離培養(yǎng)不同的輪狀病毒為以后的輪狀病毒病毒學(xué)研究做準(zhǔn)備。同時(shí)建立了一種新型的快速、高效輪狀病毒及輪狀病毒中和抗體的檢測(cè)法——酶聯(lián)免疫

3、斑點(diǎn)法,該方法是以酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法和ELISPOT自動(dòng)化掃描儀為基礎(chǔ),借助針對(duì)針對(duì)輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP6的特異性酶標(biāo)抗體7H11和VP6的特異性反應(yīng),通過(guò)TMB顯色反應(yīng)以區(qū)別感染和未感染細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的;在本論文中還從可靠性,穩(wěn)定性等方面對(duì)建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法進(jìn)行驗(yàn)證,通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)新建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法不僅具有快速、可靠、準(zhǔn)確等特點(diǎn),而且還和傳統(tǒng)的TCID50檢測(cè)法具有很好的相關(guān)性。新建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法不僅可以用