輪狀病毒VP7基因表達載體的構建及其向胡蘿卜中的轉化研究.pdf

1、該實驗以輪狀病毒的VP7為目的基因,構建了VP7基因的表達載體和VP7-CTB融合表達載體;以胡蘿卜為受體材料,建立并優(yōu)化了胡蘿卜的轉化體系,獲得了能正常轉錄VP7基因的轉基因胡蘿卜植株.以胡蘿卜品種"改良黑田"為受體材料,以胡蘿卜幼苗的下胚軸為外植體,建立了農(nóng)桿菌介導法的胡蘿卜轉化體系,并對其中的種子消毒、激素水平、外植體的苗齡、選擇壓、共培養(yǎng)時間等關鍵步驟的條件進行了優(yōu)化.結果表明:①種子的最佳殺菌條件為1﹪AgNO<,3>浸泡15

2、min;②2,4-D對愈傷組織形成有顯著的促進作用,其最佳濃度為0.1mg/L,而KT對胡蘿卜愈傷組織的分化影響不明顯;③種子發(fā)芽后6~7天的幼苗下胚軸最適于作為轉化的外植體;④Kan濃度為100mg/L時可完全抑制愈傷組織(未用農(nóng)桿菌侵染)的形成;⑤Cb濃度達到500mg/L時可完全抑制農(nóng)桿菌的生長,不會出現(xiàn)后期感染現(xiàn)象;⑥28℃,避光培養(yǎng)3天為最佳共培養(yǎng)條件;⑦農(nóng)桿菌稀釋液倍數(shù)和侵染時間對轉化沒顯著影響;⑧胡蘿卜轉化不需要附加酚類物