體內Period2基因調控X線照射后人膠質瘤細胞MDM2基因致凋亡的分子機制研究.pdf

1、目的：體內探究生物鐘基因Period2的低表達在X線照射引起的膠質瘤凋亡過程中起到的作用及其分子調控機制。
　　方法： Period2-shRNA慢病毒、Control-shRNA非特異性干擾慢病毒各自感染人p53野生型人膠質瘤U343細胞后，shRNA-Period2細胞組（Period2低表達）及對照病毒細胞組由puromycin篩選出；shRNA-Period2細胞組、Control對照病毒細胞組及 Control空白處理細

2、胞組分別注射裸鼠頸后皮下，等到各組裸鼠成瘤的瘤塊體積達到標準（1000mm3），給予10Gy X線照射3組膠質瘤并以此時為0時，分別于24h、48h、72h后，處死裸鼠并收集瘤體組織。TUNEL技術檢測實驗組凋亡情況、磷酸化H2AX含量檢測實驗組的DNA的損傷情況，使用qRT-PCR及Western Blot檢測，X線照射后，實驗各組中與DNA損傷-修復重要因子ATM、凋亡相關的p53、MDM2以及c-myc等的含量。
　　結果：

3、細胞實驗可見Period2-shRNA慢病毒有效降低在人膠質瘤U343細胞中生物鐘基因Period2的表達含量；X線處理后，在X線處理后的24h、48h、72h各個時間點，跟Control實驗組比較，Period2低表達的實驗組DNA損傷更輕，凋亡率更低，且隨著時間的增加，Period2低表達組的DNA損傷和細胞凋亡都開始遞增；隨Period2表達量的下調，ATM表達水平減少，p53表達水平減少，而 c-myc的表達水平增加，MDM2的