三氧化二砷對(duì)腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞MDM2基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究腺樣囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）中ACC-2細(xì)胞在三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）作用下，ACC-2細(xì)胞生長(zhǎng)情況及細(xì)胞中MDM2基因及蛋白表達(dá)的變化，進(jìn)一步分析As2O3促進(jìn)ACC-2細(xì)胞發(fā)生凋亡的具體機(jī)制。
　　方法：將腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)并將其分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組于細(xì)胞長(zhǎng)至指數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，向其中加入濃度分別為2、4、6、8μmol/

2、L的含As2O3的細(xì)胞培養(yǎng)液，對(duì)照組僅加入相同體積的全細(xì)胞培養(yǎng)液，在倒置顯微鏡下，持續(xù)觀察各時(shí)間段在不同濃度的As2O3溶液的刺激下，ACC-2細(xì)胞的生長(zhǎng)與凋亡狀況變化，應(yīng)用熒光定量RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)分別檢測(cè)MDM2基因（24、48h）與MDM2蛋白（24、48、72h）的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　?。?）As2O3對(duì)ACC-2細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用，且伴隨著藥物濃度和作用時(shí)間的增加，細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用逐漸加強(qiáng)，

3、顯微鏡下可見貼壁細(xì)胞出現(xiàn)縮小、變圓、脫落，細(xì)胞接觸減少間隙變大，胞膜完整，胞內(nèi)顆粒增多，細(xì)胞密度增大，胞核核分裂相減少呈空泡樣變，隨著時(shí)間和As2O3濃度增加，貼壁細(xì)胞減少，懸浮凋亡的細(xì)胞逐漸增多；
　?。?）RT-PCR結(jié)果顯示MDM2 mRNA在各組細(xì)胞中均有表達(dá)，且隨著As2O3溶液濃度不斷升高和作用時(shí)間延長(zhǎng)，MDM2 mRNA的表達(dá)明顯下降，與對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），各組兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

4、<0.05)；
　?。?）免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果示MDM2蛋白主要在細(xì)胞核中表達(dá)，細(xì)胞漿中存在少量表達(dá)，MDM2蛋白在對(duì)照組ACC-2細(xì)胞中存在基礎(chǔ)表達(dá)，ACC-2細(xì)胞在不同濃度As2O3刺激下，隨濃度及作用時(shí)間增加，陽性顆粒逐漸減少，平均光密度值（IOD/area）逐漸減小，即MDM2蛋白表達(dá)下降，不同As2O3濃度與作用時(shí)間各組，兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。MDM2蛋白的表達(dá)水平和As2O3的濃度及作用時(shí)間有明顯