Period1、Period2調(diào)控鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物節(jié)律性及擇時放療應(yīng)用的體內(nèi)研究.pdf

1、目的：在體內(nèi)研究生物鐘基因 Period1(Per1)、Period2（Per2）對鼠膠質(zhì)瘤和正常腦組織細(xì)胞中的表達(dá)節(jié)律及在不同時間段對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的放療調(diào)控作用，觀察在 Per1、Per2不同時間段放療后對膠質(zhì)瘤和正常腦組織細(xì)胞的增殖及凋亡能力的影響。
　　方法：將體外培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞接種于 SD大鼠右側(cè)的尾狀核區(qū)，建立SD大鼠的膠質(zhì)瘤動物模型。建好的膠質(zhì)瘤動物模型在12h光照/12h黑暗的光暗條件下飼養(yǎng)3周，建立大鼠的生物

2、節(jié)律模型。
　　將建好的SD大鼠生物節(jié)律模型分別在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同時段處死，取右側(cè)的膠質(zhì)瘤組織和對側(cè)的正常腦組織標(biāo)記后迅速放于液氮中保存。應(yīng)用Real-timePCR在轉(zhuǎn)錄水平上定量觀察大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞和正常腦組織細(xì)胞 Per1、Per2mRNA的及腫瘤組織 Per1、Per2蛋白表達(dá)情況。
　　利用直線加速器，在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同時段對建好的SD大鼠的節(jié)律模型進(jìn)

3、行照射，利用PCNA免疫組化技術(shù)檢測不同時間點(diǎn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及正常腦組織細(xì)胞的增殖情況，同時利用激光共聚焦技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞及正常腦組織細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：Per1、Per2基因在腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中都呈現(xiàn)出明顯的節(jié)律性。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，Per1、Per2的振蕩節(jié)律約為12小時，在這種節(jié)律表達(dá)中Per1的表達(dá)峰值在 ZT4，ZT16，谷值在 ZT12，ZT24，其中最高點(diǎn)在 ZT4，最低點(diǎn)在 ZT24；Per2的表達(dá)峰值在

4、ZT12，ZT24，谷值在 ZT8，ZT20，其中最高點(diǎn)在 ZT24，最低點(diǎn)在 ZT20；在正常腦組織細(xì)胞中，Per1、 Per2的振蕩節(jié)律約為24小時，在這種節(jié)律表達(dá)中Per1的表達(dá)峰值在 ZT8，谷值在 ZT24，其中最高點(diǎn)在 ZT8，最低點(diǎn)在 ZT24；Per2的表達(dá)峰值在 ZT12，谷值在 ZT24，其中最高點(diǎn)在 ZT12，最低點(diǎn)在 ZT24。腫瘤組織24h蛋白表達(dá)也顯示出與 mRNA表達(dá)相接近結(jié)果，也呈現(xiàn)出12h的節(jié)律表達(dá)。<

5、br>　　放療后利用PCNA檢測增殖情況顯示，在膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞中，Per1在其高表達(dá)及低表達(dá)時間點(diǎn)細(xì)胞的增值能力沒有顯著差異，在此時間點(diǎn)的正常腦組織細(xì)胞的增值能力無顯著差異；在膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞中，Per2高表達(dá)時間點(diǎn)腫瘤細(xì)胞的增殖能力明顯低于其低表達(dá)時間點(diǎn)，同時在此時間點(diǎn)的正常腦組織細(xì)胞的增值能力無顯著差異。
　　放療后利用Tunel法檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞及正常腦組織細(xì)胞的凋亡情況，膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞中，Per1在其高表達(dá)和低表達(dá)時間點(diǎn)腫瘤細(xì)

6、胞的凋亡無顯著差異，在此時間點(diǎn)的正常腦組織細(xì)胞凋亡無顯著差異；Per2在其高表達(dá)時間點(diǎn)腫瘤細(xì)胞的凋亡明顯高于其低表達(dá)時間點(diǎn)，而此時間點(diǎn)的正常腦組織細(xì)胞凋亡無顯著差異。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Per1、Per2基因在大鼠體內(nèi)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)節(jié)律為12小時，正常組織中的表達(dá)節(jié)律為24小時。腫瘤組織中高表達(dá)的Per基因能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對電離輻射的敏感性，抑制腫瘤組織細(xì)胞的的增值，促進(jìn)腫瘤組織的凋亡。同時也初步摸索了膠質(zhì)瘤對射線的敏感節(jié)