EphrinB2-EphB4介導(dǎo)EPO對破骨細(xì)胞調(diào)控機(jī)理的研究.pdf

1、目的：探討促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin,EPO）在破骨細(xì)胞分化中的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)擬以種系單一，性能穩(wěn)定的小鼠單核巨噬細(xì)胞（RAW264.7細(xì)胞）作為破骨前體細(xì)胞，研究小鼠單核巨噬細(xì)胞在體外向破骨細(xì)胞分化過程中，促紅細(xì)胞生成素與破骨細(xì)胞表面受體（Erythropoietin receptor,EpoR）結(jié)合發(fā)揮作用的機(jī)理；進(jìn)一步研究EphrinB2/EphB4軸參與EPO調(diào)控骨重塑中的作用。
　　方法：首先，EPO

2、作用于EpoR受體不沉默和沉默的經(jīng)誘導(dǎo)的小鼠單核巨噬細(xì)胞，觀察TRAP陽性多核細(xì)胞數(shù)目變化； real-time PCR檢測RAW264.7向破骨細(xì)胞分化過程中相關(guān)基因Epor、Nfatc1、Mmp9、EphrinB2基因的表達(dá)；然后，一組 RA-W264.7細(xì)胞與EphB4-Fc蛋白共培養(yǎng)后，分別加入含或不含EPO的破骨條件誘導(dǎo)液培養(yǎng)；另一組RAW264.7細(xì)胞通過EphrinB2-siRNA沉默和不沉默表面EphrinB2加入含EP

3、O的破骨條件誘導(dǎo)液培養(yǎng)。通過TRAP染色；以及Real Time PCR檢測破骨細(xì)胞相關(guān)基因c-fos、Nfatc1、Mmp9及EphrinB2(由efnb2基因編碼)的表達(dá)。
　　結(jié)果：首先，與對照組比較，EpoR受體沉沒組4天時(shí)，Nfatc1、EphrinB2以及TRAP mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.01），Mmp9 mRNA的表達(dá)明顯降低（P＜0.01）；當(dāng)形成逆向信號后，破骨相關(guān)基因Nfatc1、Mmp9表達(dá)水平降低；再