血府逐瘀膠囊調(diào)控EphB4-EphrinB2促血管新生的作用研究.pdf

1、目的：
　　 通過比較不同藥物濃度和時間作用條件下，血府逐瘀膠囊對人微血管內(nèi)皮細胞(HMEC-1)參與血管新生的功能影響，從細胞水平驗證血府逐瘀膠囊促血管新生的作用，同時選擇藥物促血管新生的最佳濃度及作用時間點，在此基礎(chǔ)上分析血府逐瘀膠囊對EphB4/EphrinB2表達的影響，為下一步闡明血府逐瘀膠囊調(diào)控EphB4/EphrinB2雙向通路促血管適度生長的作用機制奠定前期工作基礎(chǔ)，也為血府逐瘀膠囊的臨床應(yīng)用提供現(xiàn)代的科學理論依

2、據(jù)。
　　 方法：
　　 將常規(guī)培養(yǎng)的人微血管內(nèi)皮細胞(HMEC-1)隨機分為空白血清對照組和含藥血清干預組，人血清含量為1.25％、2.5％、5％，誘導處理時間為24h、48h、72h。利用MTT比色法和流式細胞周期測定法、Transwell遷移小室、黏附能力測定實驗和體外成血管實驗分別觀察各組血清對HMEC-1的增殖能力、遷移能力、黏附能力和體外成血管能力的影響。利用實時定量PCR和免疫印跡技術(shù)對EphB4和Ephr

3、inB2的表達進行檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1、對細胞活性的影響方面，在三個作用時間點，三個濃度的血府逐瘀膠囊含藥血清組與同等血清含量的空白血清組比較，OD值均無差異。
　　 2、對細胞增殖的影響方面，在三個作用時間點，三個濃度的血府逐瘀膠囊含藥血清組與同等血清含量的空白血清組比較，S期細胞比例均無差異。
　　 3、對細胞遷移的影響方面，與同等血清量的空白對照組相比，1.25％濃度的含藥血清組，在3個作

4、用時間點上，細胞遷移數(shù)均明顯增加;2.5％濃度的含藥血清組，在24h作用時間點上，細胞遷移數(shù)明顯減少，在48h、72h作用時間點上，細胞遷移數(shù)均明顯增加;5％濃度的含藥血清組，在24h作用時間點上，細胞遷移數(shù)均明顯增加，在48h、72h作用時間點上，細胞遷移數(shù)均明顯減少。
　　 4、對細胞黏附的影響方面，與同等血清量的空白對照組相比，1.25％濃度含藥血清組在前2個作用時間點細胞黏附數(shù)無差異，僅在72h時細胞黏附數(shù)明顯減少;2.

5、5％濃度含藥血清組在前2個作用時間點細胞黏附數(shù)均顯著增加，在72h時無差異;5％含藥血清組細胞黏附數(shù)在24h時明顯減少，至48h時增加，72h時無差異。
　　 5、對促血管管腔形成方面，與同等血清含量空白對照組比較，1.25％含藥血清組的血管管腔數(shù)在3個作用時間點上均無差異;2.5％含藥血清組的血管管腔數(shù)只有在48h時顯著增加，在其它2個時間點上無差異;在24h時5％含藥血清組血管管腔數(shù)無差異，在48h、72h時間點上均顯著減少

6、。
　　 6、與2.5％空白血清組比較，2.5％含藥血清誘導細胞6h、48h對EphB4基因表達量均沒有影響，在誘導12h后，EphB4基因的表達上調(diào)，隨后在24h時，EphB4基因的表達量明顯下調(diào)。
　　 7、與2.5％空白血清組比較，2.5％含藥血清誘導細胞6h、12h、24h、48h對EphrinB2基因表達量均沒有影響。
　　 8、與2.5％空白血清組比較，2.5％含藥血清誘導細胞12h、48h時，對Ep

7、hrinB2蛋白表達無影響，在24h作用時間點使EphrinB2蛋白表達顯著上調(diào)。
　　 結(jié)論：
　　 1、血府逐瘀膠囊具有顯著的促血管新生作用，其促血管新生作用存在最佳藥物作用時間點和最適宜濃度。藥物作用機制與其促細胞遷移、黏附和體外成血管等環(huán)節(jié)相關(guān)。
　　 2、血府逐瘀膠囊低濃度促進、高濃度抑制的雙向調(diào)控作用和短暫性的促血管新生功效可以調(diào)控血管適度生長。
　　 3、血府逐瘀膠囊調(diào)控血管生長與其調(diào)控Ep