楊樹D1亞類周期蛋白基因PoptrCYCD1；5的功能研究.pdf

1、植物的D類細(xì)胞周期蛋白主要調(diào)控細(xì)胞周期G1/S期的轉(zhuǎn)換過程，在細(xì)胞的分裂過程中具有重要的作用。本研究以楊樹D1亞類周期蛋白基因Poptr; CYCD1;5作為研究對象。
　　從小黑楊(Populus simonii×P.nigra)中克隆Poptr;CYCD1;5啟動子并構(gòu)建表達(dá)載體pPoptr;CYCD1;5∷GUS，通過農(nóng)桿菌（Agrobacterium）介導(dǎo)侵染擬南芥(Arabidopsis thaliana)并結(jié)合GUS染

2、色技術(shù)分析Poptr;CYCD1;5啟動子的特性，結(jié)果表明gus主要集中在葉的維管組織和根基中表達(dá)，說明Poptr;CYCD1;5啟動子具有組織特異性。利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫分析Poptr;CYCD1;5啟動子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Poptr;CYCD1;5啟動子除了含有一些基本元件外還含有應(yīng)答光的元件、應(yīng)答激素的元件，說明Poptr;CYCD1;5啟動子不但具有組織特異性還具有光誘導(dǎo)和激素誘導(dǎo)的活性。
　　利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫分析Poptr;

3、CYCD1;5的cDNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Poptr;CYCD1;5的開放閱讀框全長為930bp，共編碼309個氨基酸，該基因編碼的蛋白分子量約為34.5kDa，等電點(diǎn)為8.18。此外，還含有一個細(xì)胞周期蛋白盒和一個近N端與Rb結(jié)合的基本序列LxCxE（x代表任一氨基酸）。
　　從小黑楊中克隆Poptr; CYCD1;5的cDNA，并構(gòu)建表達(dá)載體35S∷Poptr;CYCD1;5,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)侵染煙草(Nicotiana tabacum

4、)葉片。用PCR、Northern雜交檢測轉(zhuǎn)基因煙草，結(jié)果表明Poptr;CYCD1;5已整合到煙草基因組中，并能夠在RNA水平上表達(dá)。通過對轉(zhuǎn)基因煙草植株在細(xì)胞學(xué)、解剖學(xué)、形態(tài)學(xué)等指標(biāo)的觀察，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因煙草中，Poptr;CYCD1;5的過表達(dá)影響了植物的生長發(fā)育、葉的形態(tài)建成、花的形態(tài)建成。用環(huán)境掃描電鏡觀察轉(zhuǎn)基因煙草花粉的表型，F(xiàn)DA染色檢測轉(zhuǎn)基因煙草花粉的活力以及DAPI染色觀察轉(zhuǎn)基因煙草四分體時期的花藥。結(jié)果表明，Poptr