一個(gè)遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥家系A(chǔ)LK-1基因和ENG基因突變的檢測(cè).pdf

1、目的：探討一個(gè)遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥家系的臨床特征及分子生物學(xué)特點(diǎn)。 方法:(1)對(duì)確診HHT的先證者進(jìn)行家系調(diào)查；(2)對(duì)該HHT家系的家系成員及健康自愿者ALK-1基因的10個(gè)外顯子和ENG基因的14個(gè)外顯子進(jìn)行PCR檢測(cè)；(3)對(duì)ALK-1基因和ENG基因所有外顯子PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列分析；(4)根據(jù)序列分析結(jié)果對(duì)存在突變的基因外顯子的PCR產(chǎn)物特定突變位點(diǎn)進(jìn)行限制性內(nèi)切酶試驗(yàn)。 結(jié)果: (1)先證者家系

2、中包括5代共62位家系成員，其中19位家系成員有反復(fù)鼻出血病史，43位家系成員無反復(fù)鼻出血病史；62位家系成員中45位進(jìn)行了分子生物學(xué)檢測(cè)，其中14位家系成員均有不同程度的反復(fù)鼻出血。 (2)19位存在反復(fù)鼻出血的家系成員中，男性12位，女性7位，開始出現(xiàn)鼻出血的年齡為6～15歲，開始出現(xiàn)鼻出血的平均年齡約為11歲；所有存在鼻出血的家系成員無呼吸道、消化道及泌尿道出血表現(xiàn)。 (3)PCR檢測(cè)45位家系成員及30位健康志愿

3、者均分別獲得了ALK-1基因10外顯子，ENG基因14個(gè)外顯子大小正確的單一條帶。 (4)PCR產(chǎn)物序列分析，存在反復(fù)鼻出血的14位接受檢測(cè)的家系成員均存在ENG基因第2外顯子G207A突變，而無反復(fù)鼻出血的31位家系成員及30位健康志愿者均未出現(xiàn)ENG基因第2外顯子G207A突變，45位家系成員及30位健康志愿者ENG基因第1、3～14外顯子，ALK-1基因第1～10外顯子均未發(fā)現(xiàn)突變。 (5)酶切分析，存在ENG基因

4、第2外顯子G207A突變的14位反復(fù)鼻出血患者ENG基因第2外顯子的PCR產(chǎn)物不能被限制性內(nèi)切酶GsuI完全切斷，而無鼻出血的家系成員及30位健康志愿者ENG基因第2外顯子的PCR產(chǎn)物則能被限制性內(nèi)切酶GsuI完全切斷。 結(jié)論: (1)該家系符合常染色體顯性遺傳病的特點(diǎn)，可確定為HHT家系。 (2)該HHT家系中反復(fù)鼻出血患者存在ENG基因第2外顯子G207A突變，而無鼻出血的家系成員和健康志愿者不存在ENG基因