小細胞肺癌化療耐藥microRNAs的分析及預(yù)測研究.pdf

1、目的:小細胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)以腫瘤細胞倍增時間短、早期轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)性為特點,近年來發(fā)病率不斷增長?；熓荢CLC的主要治療手段,多數(shù)患者對化療藥物非常敏感,但化療后極易復(fù)發(fā),目前認為化療耐藥是導(dǎo)致SCLC復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素。復(fù)發(fā)性SCLC患者二線化療的有效率主要取決于一線化療后緩解期長短。緩解期短于3個月的患者具有高度耐藥性。miRNA(microRNA,小RNA)是一類長約22nt非編碼RNA,可通

2、過與特定mRNA結(jié)合或調(diào)節(jié)特定mRNA的蛋白質(zhì)翻譯過程來調(diào)控基因的表達,廣泛參與動植物細胞的生長發(fā)育、分化、增殖與凋亡、激素分泌及腫瘤形成等多種重要生物過程。近年研究報道m(xù)iRNA與腫瘤化療耐藥密切相關(guān)。本研究收集SCLC臨床病例,根據(jù)緩解期進行分組,采用miRNA芯片檢測化療耐藥miRNA表達譜,篩選差異表達的miRNA,并預(yù)測受其調(diào)控的靶基因,以期探尋SCLC化療耐藥性的分子機制,尋找可能的治療干預(yù)的靶點,為臨床治療提供理論依據(jù)。<

3、br>　　方法:收集我院2011年1月-2012年12月經(jīng)病理組織學(xué)和/或細胞學(xué)檢查確診的未行手術(shù)且為初治的SCLC患者血清。根據(jù)緩解期不同分為3組:A組(緩解期≤3月),B組(3月<緩解期<6月),C組(緩解期≥6月)。采用miRNA基因芯片方法檢測組間差異表達的miRNA,對其中差異顯著的miRNA進行實時定量PCR驗證。利用TargetScan等在線軟件預(yù)測miRNA的潛在靶基因。
　　結(jié)果:芯片篩查出A組比C組上調(diào)2倍以上

4、的miRNA有5個,A組比C組下調(diào)2倍以上的miRNA有1個,B組比C組上調(diào)2倍以上的miRNA有13個。其中miR-4728-3p、miR-4443、miR-1825經(jīng)實時定量RT-PCR驗證,與芯片結(jié)果一致。應(yīng)用TargetScanHuman5.1及PicTar預(yù)測顯著差異表達的19個miRNA的靶基因。經(jīng)GO分析及KEGG分析,發(fā)現(xiàn)這些靶基因參與基因轉(zhuǎn)錄、信號轉(zhuǎn)導(dǎo),細胞凋亡、增殖、周期變化及細胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等重要的生物學(xué)過程。預(yù)測了

5、兩條信號通路與SCLC密切相關(guān),即PI3K-AKT信號通路及P53信號通路。將miR-1825、miR-4443進行靶基因功能富集分析發(fā)現(xiàn),miR-1825的靶基因中ITGA3分布于PI3K-AKT信號通路中,IKBKB、RXRB分布于P53信號通路。miR-4443的靶基因中RAR-β分布于P53信號通路,AKT1分布于PI3K-AKT信號通路中。
　　結(jié)論:我們通過miRNA芯片檢測技術(shù)在不同緩解期SCLC患者血清中找到了差異

6、表達的miRNA,提示這些miRNA可能與化療耐藥相關(guān)。預(yù)測miRNA的靶基因并進行功能富集,得到了2條與SCLC密切相關(guān)的生物信號通路,即PI3K-AKT信號通路及P53信號通路。miR-1825的靶基因ITGA3分布于PI3K-AKT信號通路中,IKBKB、RXRB分布于P53信號通路。miR-4443的靶基因中RAR-β分布于P53信號通路,AKT1分布于PI3K-AKT信號通路中。這些異常表達的miRNA通過調(diào)控相應(yīng)靶基因?qū)е?