PDGF-α受體反義寡核苷酸對(duì)體外視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的: 探討 PDGFR-α受體反義寡核苷酸對(duì)體外視網(wǎng)膜色素上皮(Retinal pigment epithelium, RPE)細(xì)胞的增殖和凋亡的作用,為PDGFR-α受體反義寡核苷酸用于防治增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法: 1.體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞株 HRPE,使用陽離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將不同質(zhì)量濃度(0、1.0、2.0μmol/L)靶向血小板源性生長因子α受體(PDGFR-

2、α)基因的ASODN轉(zhuǎn)染至細(xì)胞株RPE細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察RPE細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。2.將不同質(zhì)量濃度(0、1.0、2.0μmol/L)PDGFR-αASODN作用 RPE細(xì)胞24、48、72h后,應(yīng)用 MTT法間接檢測細(xì)胞增殖的變化,并計(jì)算抑制率。3.(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN作用RPE細(xì)胞48h后,Hoechst33258染色觀察凋亡細(xì)胞;流式細(xì)胞儀檢測PDGFR-αASODN對(duì)RPE細(xì)胞周期的影響

3、。4.RT-PCR檢測不同質(zhì)量濃度(0、1.0、2.0μmol/L)PDGFR-αASODN作用的RPE細(xì)胞后PDGFR-αmRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果: 1. PDGFR-αASODN處理RPE細(xì)胞后,細(xì)胞分裂相變少,部分細(xì)胞變圓,隨著濃度的增加,部分細(xì)胞出現(xiàn)漂浮及壞死的現(xiàn)象。PDGFR-αASODN能抑制RPE的增殖,隨著作用時(shí)間的延長和濃度的增加抑制作用越明顯,表現(xiàn)為濃度與時(shí)間依賴性(P<0.01)。2. PDGFR-αA

4、SODN能誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡,(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN處理RPE細(xì)胞48h后,凋亡率分別為:(10.9±1.7)％、(38.5±1.4)%、(61.6±2.3)%。與對(duì)照組比較,各實(shí)驗(yàn)組凋亡率明顯增加(P<0.01),各實(shí)驗(yàn)組兩兩比較差異顯著(P<0.01)。3.流式細(xì)胞術(shù)顯示:(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN作用RPE細(xì)胞后,停滯在G1期細(xì)胞百分率分別為:(34.8±1.4)

5、%、(56.3±2.3)%、(64.4±3.2)%。與對(duì)照組比較,各實(shí)驗(yàn)組G1細(xì)胞百分率明顯增加(P<0.01),各實(shí)驗(yàn)組兩兩比較差異顯著(P<0.01),呈濃度依賴性。4.(0、1.0、2.0μmol/L) PDGFR-αASODN處理RPE細(xì)胞48h后,PDGFR-αmRNA的表達(dá)呈下降趨勢。
　　結(jié)論: 1. PDGFR-αASODN能抑制RPE細(xì)胞的增殖,并表現(xiàn)為濃度和時(shí)間依賴性;PDGFR-αASODN能誘導(dǎo)RPE細(xì)胞的