靶向PDGFr-α的RNA干擾對體外視網(wǎng)膜色素上皮細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究靶向PDGFR-α的RNA干擾對體外人視網(wǎng)膜色素上皮（hRPE）細胞增殖和凋亡的影響，為臨床治療增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)提供實驗依據(jù)。
　　方法：體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮（hRPE）細胞，利用陽離子脂質(zhì)體（LipofectammineTM2000）將化學合成的PDGFR-αshRNA轉(zhuǎn)染入hRPE細胞，倒置光學顯微鏡下觀察hRPE細胞的形態(tài)學改變，按照轉(zhuǎn)染物的不同分為4組，即空白對照組;陰性對照（NC-shRNA

2、）組;1.0μg/ml PDGFR-αshRNA組;2.0μg/mlPDGFR-αshRNA組。PDGFR-αshRNA作用于hRPE細胞24h、48h、72h后，MTT法檢測RPE細胞增殖的變化，并計算抑制率;PDGFR-αshRNA作用hRPE細胞48h后，RT-PCR法檢測hRPE細胞中PDGFR-αmRNA的表達變化，應用Western blot和免疫組化技術檢測PDGFR-α的蛋白表達水平;Hoechst33258熒光染色分析

3、細胞的凋亡情況;流式細胞儀檢測PDGFR-αshRNA對hRPE細胞周期和凋亡的影響。
　　結(jié)果：PDGFR-αshRNA轉(zhuǎn)染hRPE細胞48h后，實驗組細胞出現(xiàn)細胞皺縮，間隙增寬，貼壁不牢及大量死亡細胞漂浮等現(xiàn)象，與低濃度用藥組相比，高濃度用藥組細胞出現(xiàn)細胞皺縮，核碎裂，死亡細胞漂浮現(xiàn)象更明顯。PDGFR-αshRNA作用于hRPE細胞24-72h，hRPE細胞的增殖受到抑制，且抑制作用隨濃度的升高和時間的延長而增強，轉(zhuǎn)染后24

4、、48、72h，實驗組細胞抑制率分別為（9.4±0.03;20.9±0.02;32％±0.01）％、（14.9±0.15;31.3±0.01;51.7±0.01）％與空白對照組(0;0;0)％和NC-shRNA組（1.7±0.04;2.6±0.02;2.4±0.01）％相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。PDGFR-αshRNA作用hRPE細胞48h后，PDGFR-α基因的mRNA和蛋白表達與對照組相比明顯下調(diào)，并隨藥物濃度的升高而

5、增強，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);PDGFR-αshRNA作用hRPE細胞48h后，熒光染色結(jié)果顯示:實驗組細胞出現(xiàn)核致密濃染、核分裂等細胞調(diào)亡的形態(tài)學改變與對照組相比明顯增多，流式細胞儀對細胞凋亡的檢測結(jié)果顯示PDGFR-αshRNA作用下細胞凋亡率與對照組相比明顯升高，實驗組細胞凋亡率分別為:（37.2±1.73）％、（51.8±1.41）％，與對照組（11.5±0.95）％和NC-shRNA組（13.8±1.61）％相比較，

6、差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，流式細胞儀對細胞周期檢測結(jié)果顯示PDGFR-αshRNA作用下細胞被阻滯于G1期，實驗組G1期細胞百分率分別為:（64.44±1.13）％，（75.99±0.84）％，與空白對照組（54.11±1.13）％和NC-shRNA組（55.53±1.81）％相比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：⑴PDGFR-αshRNA能抑制hRPE細胞的增殖，誘導細胞凋亡并將細胞阻滯于G1期。⑵PDG