Survivin反義寡核苷酸誘導(dǎo)K562細胞凋亡的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：靶向survivin合成反義寡核苷酸并將其轉(zhuǎn)染至survivin表達陽性的人白血病株K562細胞中，研究其對K562細胞增殖和凋亡的影響，并初步探討凋亡機制。 方法：體外培養(yǎng)人紅白血病細胞系K562細胞。針對survivin基因序列，設(shè)計合成survivin反義寡核苷酸及錯配寡核苷酸，并通過脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染至survivin表達陽性的K562細胞中。實驗分組：正常對照組、錯配寡核苷酸對照組、脂質(zhì)體對照組、survivin反義

2、寡核苷酸處理組(濃度分別為200、400、600、800、1000nmol/L)。倒置光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細胞形態(tài)學(xué)變化；錐蟲藍拒染法觀察survivin反義寡核苷酸對K562細胞增殖的影響；噻唑藍(MTT)法觀察survivin反義寡核苷酸對K562細胞的細胞毒作用，及5-氟尿嘧啶(5-FU)聯(lián)合survivin反義寡核苷酸對K562細胞增殖的影響，計算各組細胞的生長抑制率，測定IC50；Hoechst33342/PI雙熒光染色后，熒光

3、顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染survivin反義寡核苷酸以及5-FU聯(lián)合survivin反義寡核苷酸處理后K562細胞細胞核變化，計算各組細胞凋亡率；激酶活性測定方法檢測各組細胞中caspase-3活性；800nmol/Lsurvivin反義寡核苷酸處理K562細胞后，經(jīng)SDS-PAGE分離蛋白，WesternBlot檢測細胞中survivin的表達。 結(jié)論：Survivin反義寡核苷酸可抑制K562細胞增殖，提高K562細胞對5-FU的敏

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