端粒酶反義寡核苷酸抑制視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增生的實驗研究.pdf

1、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文端粒酶反義寡核苷酸抑制視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增生的實驗研究姓名：趙宏申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：曾水清2002.4.23華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院99級博士學(xué)位論文式細(xì)胞儀檢測其對RPE細(xì)胞增生活性及細(xì)胞周期的影響；使用TRAP法定性、定量檢測不同濃度的端粒酶AS—ODN和SODN對RPE細(xì)胞端粒酶活性的影響。3)使用TRAP及逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)fRTPCR)檢測不同濃度的轉(zhuǎn)化生長因子一D1(Tra

2、nsformingGroMhFactor—Bl，TGF—B1)對RPE細(xì)胞端粒酶活性及其相關(guān)蛋白hTERT和TEP，mRNA的影響。結(jié)果1)抗角蛋白免疫組織化學(xué)染色幾乎所有的RPE細(xì)胞呈陽性著色，TRAP和原位分子雜交技術(shù)定性、定量檢測RPE細(xì)胞端粒酶活性及hTERT基因在RPE細(xì)胞中表達(dá)，其結(jié)果一致均為弱表達(dá)。2)陽離子質(zhì)脂體Lipofectamine”2000介導(dǎo)的不同濃度的端粒酶AS—ODN和端粒酶SODN轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)

3、胞后，隨著端粒酶ASODN濃度的升高，RPE細(xì)胞的增生活性被明顯抑制，并將RPE細(xì)胞阻滯在洲G1期，端粒酶SODN對RPE細(xì)胞的增生活性無明顯的抑制作用且不能改變RPE的細(xì)胞周期：TRAP實驗顯示，不同濃度的端粒酶ASODN能抑制RPE細(xì)胞端粒酶活性且呈劑量依賴性。3)TRAP和RTPCR實驗顯示：不同濃度的TGF—B；能抑制RPE細(xì)胞端粒酶活性及hTERT基因的表達(dá)，呈劑量依賴性，對TEPlmRNA影響不明顯。結(jié)論1)陽離子質(zhì)脂體Li