伏馬毒素免疫檢測(cè)及免疫親和柱純化的研究.pdf

1、論文試驗(yàn)中使用戊二醛一步法將伏馬毒素與KLH連接,制備伏馬毒素的免疫原。用此連接制得免疫原免疫兔子,得到了兩種特異性多克隆抗體。分別考察這兩種抗體的親和力,選擇特異性較好的1號(hào)抗體進(jìn)行酶聯(lián)免疫分析和免疫親和柱的研究。
　　 對(duì)酶聯(lián)免疫分析中多項(xiàng)條件的優(yōu)化,認(rèn)為該試驗(yàn)的最佳包被量為1 μg/孔,最佳酶標(biāo)用量為1:12000,在pH值為7.5時(shí),使用1倍PBS作為稀釋液可以得到最佳檢測(cè)效果,該酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)的最低檢測(cè)限IC15為0

2、.18±0.08μg/kg。分別選擇玉米、大麥、小麥和燕麥為試劑樣品檢測(cè)的對(duì)象,采用稀釋與添加掩蔽劑結(jié)合的方法,針對(duì)不同的樣品,分別采取不同的方式有效地消除了基質(zhì)對(duì)ELISA分析結(jié)果的影響。隨后,分別對(duì)上述樣品進(jìn)行了伏馬毒素的添加回收試驗(yàn),結(jié)果表明四種谷物的回收率皆在65％-95％之間。為實(shí)際應(yīng)用酶聯(lián)免疫試劑盒的推出,進(jìn)行了抗體凍干穩(wěn)定性試驗(yàn)和酶標(biāo)抗原以及抗體的穩(wěn)定性試驗(yàn),分析結(jié)果認(rèn)為可保證試劑盒在4℃條件下放置6個(gè)月仍保持檢測(cè)性能基本