Aβ對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元損傷及UCP2表達(dá)意義的初步研究.pdf

1、目的：研究Aβ對(duì)體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的毒性作用，及UCP2在Ap誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元損傷中的可能作用。 阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種以損害大腦記憶和認(rèn)知功能為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，發(fā)病機(jī)制目前還不是很清楚?，F(xiàn)有大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床資料表明Aβ是各種病因誘發(fā)AD的共同通路，是AD形成和發(fā)展的關(guān)鍵因素，而自由基損傷是Aβ的主要毒性機(jī)制。自由基氧化應(yīng)激增強(qiáng)會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA的損傷，而且因?yàn)楦?/p>

2、的代謝率、低水平的抗氧化劑、再生能力差等多種原因神經(jīng)元很容易受到自由基的影響。 解偶聯(lián)蛋白2(untoupling protein 2，UCP2)是線粒體內(nèi)膜解偶聯(lián)蛋白家族成員，廣泛分布于人類及嚙齒類動(dòng)物的多種器官。目前，UCP2的生理功能尚不十分清楚，較多研究表明，UCP2可通過“質(zhì)子漏”及氧化磷酸化解偶聯(lián)作用，降低ROS產(chǎn)生，對(duì)細(xì)胞形態(tài)、功能起到保護(hù)作用。因此，我們推測(cè)UCP2可能通過其降低ROS的功能，對(duì)Aβ誘導(dǎo)大鼠海馬神

3、經(jīng)元損傷有保護(hù)作用。 方法：選用出生24小時(shí)內(nèi)的SD大鼠，無菌分離并培養(yǎng)海馬神經(jīng)元，倒置顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，培養(yǎng)至9-10天，經(jīng)冷丙酮固定后，尼氏染色鑒定神經(jīng)元。將終濃度分別為5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L Aβ1-40加入到培養(yǎng)9天的海馬神經(jīng)元中，共同孵育24小時(shí)。觀察Aβ1-40對(duì)海馬神經(jīng)元的毒性作用，臺(tái)盤蘭染色法鑒定神經(jīng)元的存活率，檢測(cè)細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶和一氧化氮含量的變化。免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察UC

4、P2的定位與表達(dá)變化。 結(jié)果： 1．原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元，倒置顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，尼氏染色鑒定神經(jīng)元，細(xì)胞胞漿內(nèi)藍(lán)紫色顆粒及明顯的空泡狀核，為神經(jīng)元所特有，占細(xì)胞總數(shù)90％以上。細(xì)胞的數(shù)量與狀態(tài)可用于本研究。 2．不同濃度Aβ1-40損傷海馬神經(jīng)元后，臺(tái)盤蘭染色結(jié)果顯示10μmol/L和20μmol/L Aβ1-40損傷組與其它組相比有顯著性差異，細(xì)胞存活率明顯下降(n=3，P<0.001)：20μmol/L

5、 Aβ1-40損傷組細(xì)胞上清液中LDH明顯增加，與其他組相比有顯著性差異(n=4,P<0.05)。 3.20μmol/L Aβ1-40損傷組細(xì)胞上清液中NO明顯增加，與其它組相比有顯著性差異(n=4，P<0.05)。 4．免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示UCP2在海馬神經(jīng)元胞漿中有表達(dá)。5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L Aβ1-40損傷海馬神經(jīng)元后。神經(jīng)元胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色UCP2陽性染色顆粒，其中20μmol/L

6、Aβ1-40損傷組陽性顆粒尤其豐富，平均相對(duì)光密度與其他組相比有顯著性差異(P<0.05)。 5.Aβ1-40損傷海馬神經(jīng)元后，將NO與LDH、UCP2與NO做相關(guān)性分析，結(jié)果表明：在Aβ1-40終濃度小于20μmol/L時(shí)，NO與LDH之間存在顯著正相關(guān)(n=4，P<0.00l，r=0.864)，UCP2與NO之間存在顯著正相關(guān)(n=4，P<0.00l，r=0.799)。 結(jié)論： 1.Aβ1-40對(duì)海馬神經(jīng)元有