遠(yuǎn)志對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)元胞體及海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥之一。其中糖尿病周圍神經(jīng)病變( diabetic peripheral neuropathy,DPN)發(fā)病率高達(dá)47％~91%,是DM患者致殘甚至致死的主要原因之一;以認(rèn)知功能障礙為主要表現(xiàn)的糖尿病腦病(diabetic encephalopathy,DE)發(fā)病率也日益增高。糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,已成為DM研究的重要課題。糖尿

2、病神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確,進(jìn)一步探討其發(fā)病機(jī)制對(duì)臨床預(yù)防和治療具有十分重要的意義。
　　近年來(lái),中藥多靶點(diǎn)治療疾病受到越來(lái)越多的關(guān)注。以往的研究證實(shí),中藥遠(yuǎn)志(Polygala)對(duì)癡呆、衰老等動(dòng)物模型的中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用,但關(guān)于遠(yuǎn)志對(duì)周圍神經(jīng)系統(tǒng)及DM海馬損傷作用的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。
　　本研究采用腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)建立DPN大鼠模型,探討遠(yuǎn)志對(duì)DPN大鼠坐骨

3、神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)元胞體和海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用,為臨床預(yù)防和治療糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　第一部分遠(yuǎn)志對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)元胞體的保護(hù)作用
　　目的:
　　本研究采用腹腔注射STZ建立DPN大鼠模型,通過(guò)觀察大鼠背根節(jié)神經(jīng)元和脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)和凋亡相關(guān)指標(biāo)的變化,進(jìn)一步探討DPN的發(fā)病機(jī)制,并研究遠(yuǎn)志對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)元胞體的保護(hù)作用,為預(yù)防和治療DPN提供理論依據(jù)和實(shí)

4、驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　雄性Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組,每組12只。DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠給予遠(yuǎn)志(生藥2.7g/kg/d)灌胃6周;DPN模型組和遠(yuǎn)志治療組大鼠以尾部感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(sense nerve conduction velocity,SNCV)<30m/s為標(biāo)準(zhǔn)建立DPN大鼠

5、模型。DPN大鼠模型建立后,遠(yuǎn)志治療組大鼠給予遠(yuǎn)志(生藥2.7g/kg/d)灌胃6周。
　　分別測(cè)定大鼠血糖(blood glucose,BG)和尾部SNCV;尼氏染色法觀察大鼠背根節(jié)神經(jīng)元和脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化;末端脫氧核苷酰基轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)性 dUTP切口末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL

6、)檢測(cè)大鼠背根節(jié)神經(jīng)元和脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元凋亡指數(shù)(apoptotic index,AI)的變化;免疫組織化學(xué)染色及免疫印跡檢測(cè)大鼠背根節(jié)Bcl-2蛋白、Bax蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1各組大鼠BG：
　　DPN模型組大鼠的BG為(25.40±4.22)mmol/L,明顯高于正常對(duì)照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠的BG分別為(15.80±5.60)mmol/L、(17.20±4.56)mm

7、ol/L,均明顯低于 DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　2各組大鼠尾部SNCV：
　　DPN模型組大鼠尾部SNCV為(27.45±1.16)m/s,明顯低于正常對(duì)照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠尾部SNCV分別為(33.01±1.98)m/s、(33.20±1.09)m/s,均明顯高于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　3各組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元胞體的形態(tài)結(jié)構(gòu)：
　　光鏡下正常對(duì)照組大鼠

8、背根節(jié)神經(jīng)元胞體結(jié)構(gòu)完整,體積飽滿,胞核呈圓形居胞體正中,尼氏體呈小斑塊狀。DPN模型組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元胞體明顯縮小,神經(jīng)元池明顯增寬,尼氏體溶解;部分神經(jīng)元胞體變性,胞核溶解、消失。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠背根節(jié)大部分神經(jīng)元胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)接近正常狀態(tài),均明顯好于DPN模型組大鼠。
　　4各組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元AI：
　　DPN模型組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元AI為(40.22±2.79)%,明顯高于正常對(duì)照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志

9、治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元 AI分別為(22.87±2.50)%、(15.45±2.24)%,均明顯低于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　5各組大鼠背根節(jié)Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)
　　免疫組織化學(xué)染色:Bcl-2、Bax蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀,位于背根節(jié)神經(jīng)元的胞漿和核膜,以胞漿為主。與正常對(duì)照組大鼠比較, DPN模型組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.01), Bax陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)

10、明顯增多(P<0.01)。與DPN模型組大鼠比較,遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠背根節(jié)神經(jīng)元 Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯增多(P<0.01),Bax陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯減少(P<0.01)。
　　免疫印跡:與正常對(duì)照組大鼠比較,DPN模型組大鼠背根節(jié) Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01),Bax蛋白表達(dá)明顯增高(P<0.01)。與DPN模型組大鼠比較,遠(yuǎn)志治療組及遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠背根節(jié)Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯增高(P<0.01),Ba

11、x蛋白表達(dá)均明顯降低(P<0.01)。
　　6各組大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體的形態(tài)結(jié)構(gòu)：
　　正常對(duì)照組大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體形態(tài)完整,突起清晰可見(jiàn),胞核呈圓形居胞體正中,核仁清晰,尼氏體呈斑塊狀。DPN模型組大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元著色深淺不一,胞體腫脹,尼氏體溶解,細(xì)胞核移位;部分細(xì)胞胞核溶解、消失。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體形態(tài)均基本接近正常對(duì)照組大鼠,并明顯好于DPN模型組大鼠。
　　7

12、各組大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元AI：
　　DPN模型組大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元AI為(45.25±3.67)%,明顯高于正常對(duì)照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元AI分別為(27.84±3.91)%、(11.95±1.44)%,均明顯低于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、遠(yuǎn)志可降低DPN大鼠BG,提高DPN大鼠尾部SNCV。
　　2、遠(yuǎn)志可改善 DPN大鼠坐骨神經(jīng)

13、相關(guān)神經(jīng)元胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)的病理變化,并可上調(diào)DPN大鼠背根節(jié)神經(jīng)元Bcl-2蛋白的表達(dá),下調(diào)Bax蛋白的表達(dá),降低DPN大鼠背根節(jié)神經(jīng)元和脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元AI,減少細(xì)胞凋亡。
　　3、遠(yuǎn)志對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)元胞體損傷具有預(yù)防和保護(hù)作用。
　　第二部分遠(yuǎn)志對(duì)DPN大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用
　　目的:
　　本研究采用腹腔注射STZ建立DPN大鼠模型,通過(guò)觀察大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)及數(shù)量變化、AI的變化、凋亡

14、相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的變化,探討遠(yuǎn)志對(duì) DPN大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及作用機(jī)制。
　　方法:
　　雄性Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組,每組12只。DPN模型組、遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠給予遠(yuǎn)志(生藥2.7g/kg/d)灌胃6周;DPN模型組和遠(yuǎn)志治療組大鼠以尾部感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度 SNCV<30m/

15、s為標(biāo)準(zhǔn)建立 DPN大鼠模型。DPN大鼠模型建立后,遠(yuǎn)志治療組大鼠給予遠(yuǎn)志(生藥2.7g/kg/d)灌胃6周。
　　尼氏染色法觀察大鼠海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)及數(shù)量的變化, TUNEL檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元AI的變化,免疫印跡檢測(cè)大鼠海馬組織Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)量
　　正常對(duì)照組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列緊密、整齊,核膜完整,核仁清晰可見(jiàn),

16、尼氏體密集,位于核周。DPN模型組大鼠海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元排列稀疏,生存神經(jīng)元數(shù)量明顯減少;部分細(xì)胞可見(jiàn)胞核溶解、消失,尼氏體溶解;并可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞增生。遠(yuǎn)志治療組及遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)均接近正常,僅有少量細(xì)胞脫失。
　　2各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元AI
　　DPN模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元AI為(64.42±4.73)%,明顯高于正常對(duì)照組大鼠(P<0.01)。遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元A

17、I分別為(42.68±2.38)%、(31.68±1.48)%,均明顯低于DPN模型組大鼠(P<0.01)。
　　3各組大鼠海馬組織Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)
　　與正常對(duì)照組大鼠比較,DPN模型組大鼠海馬組織Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01),Bax蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)。與DPN模型組大鼠比較,遠(yuǎn)志治療組和遠(yuǎn)志預(yù)防組大鼠海馬組織 Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯增多(P<0.01),Bax蛋白表達(dá)均明顯減少(