美滿霉素對癲癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、癲癇是一種常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，由于其發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性和癲癇類型的多樣性，癲癇的防治至今仍然是神經(jīng)科學(xué)工作者攻克的重點(diǎn)課題。癲癇發(fā)作可以導(dǎo)致腦內(nèi)多種凋亡相關(guān)基因的表達(dá)和神經(jīng)元的凋亡，并且以海馬神經(jīng)元凋亡最為顯著，這可能是導(dǎo)致癲癇患者后期認(rèn)知功能障礙和情感障礙的原因之一。有研究表明，第二代半合成的四環(huán)素類衍生物美滿霉素（Minocycline，MC），在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和神經(jīng)退行性疾病的動物模型中具有神經(jīng)保護(hù)作用，并提出美滿霉素的神經(jīng)保

2、護(hù)機(jī)制與其減少神經(jīng)炎性和阻礙細(xì)胞死亡這兩個方面有關(guān)，但它在癲癇中的研究還比較少，因此，本研究旨在探討美滿霉素對癲癇模型大鼠海馬神經(jīng)元的抗凋亡保護(hù)作用，以期為癲癇的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 采用SD 雄性大鼠96只，隨即分為三組：生理鹽水對照組（NS組），海人酸致癇組（KA組）和美滿霉素預(yù)處理+海人酸組（MC+KA組）。KA組側(cè)腦室注射KA(2μg/kg)以致癇，NS組則注射等容量的生理鹽水，MC+KA組先腹腔注射MC（45m

3、g/kg）預(yù)處理，12h后側(cè)腦室注射KA(2μg/kg)以致癇，KA 處理30min后再次腹腔注射MC 90mg/kg。各組大鼠在側(cè)腦室注射造模后觀察其行為學(xué)變化2 小時左右；并于存活2h、8h、24h和48h后分批處死動物。采用免疫組織化學(xué)SABC 法顯示大鼠海馬部位細(xì)胞色素 C(Cytochrome C，Cyt C)和caspase-3 免疫反應(yīng)的變化；RT-PCR法檢測caspase-3 mRNA 含量；WesternBlot 法

4、檢測Bcl-2和Bax 蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NS組大鼠行為表現(xiàn)無異常；KA 致癇組大鼠癲癇發(fā)作達(dá)Ⅳ～Ⅴ級，可持續(xù)2h 左右；MC+KA組大鼠癲癇發(fā)作強(qiáng)度較KA 致癇組明顯減弱，為Ⅱ～Ⅲ級。免疫組織化學(xué)方法結(jié)果顯示：在KA 致癇后2h Cyt C 即開始有陽性表達(dá)，8h 達(dá)到高峰，24h表達(dá)減少，而MC 預(yù)處理明顯減弱此效應(yīng)。RT-PCR和免疫組織化學(xué)方法結(jié)果顯示caspase-3 mRNA的含量及caspase-3

5、免疫反應(yīng)性在24h 時間點(diǎn)三組之間無明顯差異，在48h 時間點(diǎn)，KA組明顯高于對照組(P<0.05)，MC 預(yù)處理則明顯拮抗KA 誘導(dǎo)的caspase-3 高表達(dá)。Western Blot 結(jié)果顯示：大鼠海馬組織Bcl-2和Bax 蛋白的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。與對照NS組相比，KA組Bcl-2 蛋白表達(dá)降低而Bax 蛋白表達(dá)升高；與KA組相比，在MC+KA組Bcl-2 蛋白表達(dá)升高而Bax 蛋白表達(dá)降低。且Bcl-2/Bax 值在48h 時

6、間點(diǎn)比24h 時間點(diǎn)更低。
　　 上述研究結(jié)果提示，KA 致癇能誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)元凋亡，而MC 預(yù)處理不僅能抑制KA 誘導(dǎo)的致癇效應(yīng)，而且能減少Cyt C 從線粒體釋放入胞漿，從而減少凋亡體的生成；并抑制凋亡效應(yīng)蛋白caspase-3的激活，抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生；另外還通過增大Bcl-2/Bax的比值抑制凋亡發(fā)生，這些結(jié)果提示MC 對KA 致癇大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)揮了抗凋亡的神經(jīng)保護(hù)作用。這對于臨床癲癇防治、神經(jīng)保護(hù)有重要的啟示意義。