不同劑量雌激素對去勢致癎大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、目的：癲癇(epilepsy)源于希臘之epilambanein，意為發(fā)作，是一組由大腦神經(jīng)元群過度放電所致的神經(jīng)系統(tǒng)慢性功能性疾病。顳葉癲癇是一種常見的難治性部分發(fā)作性癲癇，其典型臨床表現(xiàn)由先兆癥狀和復雜部分性發(fā)作癥狀兩部分組成。顳葉癲癇持續(xù)發(fā)作會增加海馬結構永久性損傷的危險性。海人酸模型是一種理想的顳葉癲癇模型。雌激素是一種神經(jīng)甾體激素，由于其分子量小且有親脂性的特點，易于透過血腦屏障到達神經(jīng)組織。雌激素對癲癇的作用較為復雜。198

2、5年Mattson and Cramer及1997年Herzog等均報道在一些女性患者月經(jīng)期內(nèi)有癲癇發(fā)作頻率的改變，稱之為經(jīng)期性癲癇。臨床觀察發(fā)現(xiàn)雌激素可能為致驚厥因素。女性顳葉癲癇患者常有生殖性內(nèi)分泌紊亂，如無排卵周期或月經(jīng)過少。對于這些女性患者，恢復正常的排卵周期是一種有效地治療方法。2000年Peebles等報道雌激素單一替代療法可以降低絕經(jīng)后期癲癇發(fā)生率。動物實驗表明，雌激素劑量可能影響到其對癲癇易感性的作用。2000年Veli

3、skova等報道低于10ug的雌二醇預處理可以延遲海人酸致癇去勢大鼠陣攣發(fā)作的時間，與此同時，Reibel報道20ug雌二醇對癲癇發(fā)作的閡值沒有影響，40ug則有致驚厥作用。實驗數(shù)據(jù)表明，雌激素可能對去勢雌性大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后神經(jīng)損傷有保護作用。2000年Veliskova等報道生理劑量雌二醇可以降低海人酸致癇大鼠的死亡率，對癲癇后海馬CA3區(qū)神經(jīng)損傷有保護作用。由于以往研究因動物模型、實驗技術及科研方法的不同，導致研究結論的可比性有限

4、。本實驗在條件一致的情況下，采用不同劑量的雌激素處理，通過觀察海人酸致癇大鼠發(fā)作程度、潛伏期及死亡率，并利用HE染色及免疫組化染色技術，觀察雌激素治療對癲癇發(fā)作的影響及癲癇發(fā)作造成海馬神經(jīng)元凋亡及Bcl-2、Bax表達的影響，了解雌激素對于癲癇發(fā)作的影響及其劑量依賴性。 方法：將70只健康雌性SD大鼠在無菌條件下行雙側卵巢切除術，術后14天隨機分為5組，分別為正常對照組(第1組)6只，癲癇對照組(第2組)、雌激素10ug/kg治

5、療組(第3組)、雌激素100ug/kg治療組(第4組)、雌激素1mg/kg治療組(第5組)各16只。正常對照組及癲癇對照組大鼠間隔24h 5次皮下注射0.1ml芝麻油，三組治療組同時分別給予皮下注射17 β-雌二醇苯甲酸鹽(beta-estradiolbenzoate，EB)10ug/kg、100ug/kg、1mg/kg，癲癇對照組及治療組大鼠在第5次給藥后19h利用立體定位儀向大鼠右側海馬CA3區(qū)注射海人酸4ug/kg(溶于生理鹽水濃

6、度為2ug/ul)致癇，正常對照組以生理鹽水代替。發(fā)作程度按Racine分級標準評分，觀察并記錄大鼠行為變化、死亡率及癲癇持續(xù)狀態(tài)開始的時間，計算潛伏期。癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作后2小時，三組治療組間隔24h 2次分別皮下注射EB10ug/kg、100ug/kg、1mg/kg，對照組以芝麻油代替。各組大鼠最后一次皮下注射EB或芝麻油后24小時用冷鹽水灌注，4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液固定及后固定，石蠟包埋。將石蠟切片進行HE染色觀察細胞凋亡，免疫組

7、織化學染色觀察Bcl-2、Bax的表達。結果采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理。所有計量資料采用均數(shù)±標準差表示。統(tǒng)計學方法采用卡方檢驗、Kruskal-WallisH檢驗、單因素方差分析和Dunnett-t檢驗。 結果：癲癎對照組與三組不同劑量雌激素治療組大鼠均達到癲癎持續(xù)狀態(tài)，抽搐發(fā)作程度均在Ⅲ級以上，比較無統(tǒng)計學意義。癲癎對照組及三組雌激素治療組癲癎持續(xù)狀態(tài)的潛伏期分別為79.63±5.06min，77.06±4.82min

8、，77.56±7.15min，69.63±6.18min。雌激素10ug/kg治療組、雌激素100ug/kg治療組與癲癎對照組比較無差異(P>0.05)，雌激素1mg/kg治療組與癲癎對照組比較有差異(P<0.05)，可以縮短癲癎持續(xù)狀態(tài)發(fā)作的潛伏期。癲癎對照組及三組雌激素治療組的死亡率分別為37.5％、6.25％、6.250％、6.25％，三組不同劑量雌激素組與癲癎對照組比較均有差異(P<0.05)，三組不同劑量雌激素組之間比較無差異

9、(P>0.05)。 HE染色結果：凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)正常對照組凋亡指數(shù)為7％，半定量+，EB 10ug/kg、100ug/kg治療組凋亡指數(shù)分別為12％，15％，半定量++。癲癎對照組與EB 1mg/kg治療組凋亡指數(shù)分別為25％，22％，半定量為+++。癲癎對照組與正常對照組比較凋亡細胞數(shù)目明顯增多，EB10ug/kg、100ug/kg治療組與癲癎對照組相比凋亡細胞數(shù)目減少，比較有統(tǒng)計學意義。EB

10、 1mg/kg治療組與癲癎對照組比較無統(tǒng)計學意義。 免疫組織化學染色結果：各組大鼠(按分組順序)Bcl-2的表達分別為：2.80±0.84，2.20±1.32，3.74±1.81，3.14±1.83，3.27±1.16，雌激素治療組與癲癎對照組比較均無統(tǒng)計學意義。Bax的表達分別為：23.80±6.98，53.20±8.30，37.60±4.58，36.14±6.01，52.53±5.94，癲癎對照組與正常對照組比較Bax的表達

11、明顯增加，比較有統(tǒng)計學意義，雌激素10ug/kg、100ug/kg治療組Bax表達減少，與癲癎對照組比較有統(tǒng)計學意義，雌激素1 mg/kg治療組與癲癎對照組比較無統(tǒng)計學意義。 結論：雌激素對于海人酸致癇大鼠癲癎易感性受劑量影響，較大劑量雌激素可縮短海人酸致癇大鼠癲癎持續(xù)狀態(tài)潛伏期，增加其易感性。雌激素雖不能降低海人酸致癎大鼠癲癎發(fā)作的嚴重程度，但可以降低癲癎持續(xù)狀態(tài)后大鼠的死亡率，且不依賴于劑量的影響。癲癎持續(xù)發(fā)作后48h大鼠海