雌激素對SAMP8小鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用SAMP8小鼠為研究對象，觀察去卵巢及雌激素補(bǔ)充治療對SAMP8小鼠學(xué)習(xí)記憶、海馬神經(jīng)元的影響以及對海馬nNOS陽性神經(jīng)元的作用。探討雌激素改善學(xué)習(xí)記憶能力的機(jī)制，為雌激素補(bǔ)充治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：選用6月齡雌性SAMP8小鼠45只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（SHAM組），去卵巢組（OVX組）和去卵巢+雌激素組（OVX+E組）3組各15只，另外再選取SAMR1（R1組）雌性小鼠15只作為SAMP8小鼠的同源正常對照組

2、。SHAM組、R1組在暴露雙側(cè)卵巢后即縫合傷口，OVX組和OVX+E組行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。術(shù)后OVX+E組每3天肌注一次苯甲酸雌二醇5g/只，其余各組均肌注等量的無菌芝麻油，共持續(xù)3個(gè)月。
　　 1.Morris水迷宮試驗(yàn)：給藥結(jié)束后，將小鼠在水迷宮中適應(yīng)環(huán)境1天。試驗(yàn)在每天上午進(jìn)行。首先定位航行試驗(yàn)：將Morris水迷宮均分為4個(gè)象限，平臺(tái)放入其中1個(gè)象限中。小鼠分別自4個(gè)象限面向池壁入水，視頻采集系統(tǒng)跟蹤并記錄找到平臺(tái)所需的時(shí)

3、間。在第6天撤掉平臺(tái)進(jìn)行空間探索試驗(yàn)，記錄小鼠120s內(nèi)跨越平臺(tái)的次數(shù)。
　　 2.透射電鏡標(biāo)本制備、觀察：小鼠給予6％水合氯醛腹腔注射麻醉，經(jīng)左心室-升主動(dòng)脈插管，同時(shí)剪開右心耳，用生理鹽水快速?zèng)_洗，用2％多聚甲醛-2％戊二醛混合固定液常生理鹽水快速?zèng)_洗，用2％多聚甲醛-2％戊二醛混合固定液常規(guī)灌注固定，持續(xù)1h，取鼠腦海馬CA1區(qū)組織塊放入固定液中，經(jīng)1％鋨酸固定1.5h（4℃）、常規(guī)脫水、100％丙酮脫水、包埋液包埋、半薄

4、切片定位錐體細(xì)胞層、超薄切片、重金屬電子染色后用H-7500型透射電鏡觀察海馬CA1區(qū)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)并拍照。
　　 3.HE染色、免疫組化的觀察：小鼠給予6％水合氯醛腹腔注射麻醉，經(jīng)左心室-升主動(dòng)脈插管，同時(shí)剪開右心耳，用生理鹽水沖洗，4％多聚甲醛灌注1h。自上丘至視交叉節(jié)段取腦組織，制備二套石蠟切片，分別用于HE染色，抗nNOS免疫組化染色。
　　 4.流式細(xì)胞儀檢測：將小鼠斷頭取腦，迅速于冰盤上剝離海馬組織，于4℃70

5、％乙醇中固定。采用網(wǎng)搓法制備單細(xì)胞懸液，抗nNOS多克隆抗體孵育，流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1.Morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果：定位航行試驗(yàn)：OVX組與SHAM組和OVX+E組相比明顯延長（P<0.05），OVX+E組與SHAM組比較，每天的逃避潛伏期差別不明顯（P>0.05），空間探索試驗(yàn)：OVX組的游泳軌跡主要呈隨機(jī)分布狀態(tài)，SHAM組和OVX+E組的游泳軌跡主要集中在原平臺(tái)象限區(qū)域，且OVX組跨越平臺(tái)次

6、數(shù)少于SHAM組和OVX+E組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），OVX+E組與SHAM組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 2.HE染色觀察結(jié)果：OVX組：CA1區(qū)細(xì)胞層次排列絮亂，細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，大量錐體細(xì)胞空泡變及濃染。OVX+E組：CA1區(qū)細(xì)胞層次排列尚規(guī)整，細(xì)胞間隙增大不明顯，少量錐體細(xì)胞濃染。SHAM組：CA1區(qū)錐體細(xì)胞病變情況與OVX+E組基本相同。R1組：CA1錐體細(xì)胞層次清楚，排列整齊緊密

7、均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，核仁清晰可見。
　　 3.透射電鏡觀察結(jié)果：OVX組：CA1區(qū)大部分錐體細(xì)胞核膜結(jié)構(gòu)模糊不清，染色質(zhì)邊集以及大量脂褐素顆粒沉積，線粒體腫脹明顯。OVX+E組：CA1區(qū)多數(shù)錐體細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，核仁明顯，染色質(zhì)分布均勻，線粒體大小及形態(tài)正常，個(gè)別細(xì)胞可見核膜雙層結(jié)構(gòu)不清晰和染色質(zhì)邊際現(xiàn)象以及少量脂褐素顆粒沉積。SHAM組與OVX+E組情況基本一致。R1組：CA1區(qū)錐體細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，核膜雙層結(jié)構(gòu)清晰可見，核仁明顯，

8、染色質(zhì)分布均勻，胞質(zhì)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和核糖體等細(xì)胞器結(jié)構(gòu)完好，線粒體大小及形態(tài)正常。
　　 4.免疫組化試驗(yàn)觀察結(jié)果：OVX組陽性神經(jīng)元數(shù)量及光密度值明顯低于SHAM組和OVX+E組（P<0.05），OVX+E組與SHAM組比較無明顯差別（P>0.05）。
　　 5.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)檢測nNOS FI值結(jié)果表明，OVX組低于SHAM組和OVX+E組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。OVX+E組與SHA

9、M組相比兩者差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.SAMP8小鼠去卵巢后，雌激素的缺乏導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶能力下降；雌激素補(bǔ)充治療能減輕內(nèi)源性雌激素下降對學(xué)習(xí)記憶功能的損害，改善學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 2.SAMP8小鼠去卵巢后，雌激素缺乏導(dǎo)致海馬神經(jīng)元排列疏松紊亂、細(xì)胞腫脹變性，細(xì)胞數(shù)目減少，超微結(jié)構(gòu)受損；雌激素補(bǔ)充治療能改善病理損傷，減少神經(jīng)元的丟失。
　　 3.SAMP8小鼠去卵巢后，雌