用RNAi及芯片技術(shù)對肝癌細胞中DNMT3B下游基因的初步鑒定.pdf

1、目的：探索DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B(DNMT3B)在腫瘤發(fā)生中的作用。探查DNMT3 B在人正常肝細胞株、肝癌癌旁及肝癌細胞株中的蛋白表達水平，然后在肝癌細胞系中通過載體介導(dǎo)的RNA干擾抑制DNMT3B的表達，分析與鑒定DNMT3B下游基因表達譜。 方法：用Western blotting及細胞免疫化學(xué)分析：DNMT3 B蛋白在人正常肝細胞株、肝癌癌旁及肝癌細胞株的表達。RNAi重組載體pSL/PER-EGFP-MT3B轉(zhuǎn)染肝癌細胞

2、株SMMC-7721。通過RT-PCR及Western blotting方法鑒定DNMT3B的抑制效率。用cDNA基因芯片分析基因表達譜。 結(jié)果：DNMT3B在肝癌細胞株中的表達水平明顯高于肝癌癌旁和正常肝細胞株。通過RNAi，DNMT3B在肝癌細胞系中的表達被抑制，RNA干擾的抑制效率>80﹪。當DNMT3B表達抑制后，有115條基因表達上調(diào)，26條基因表達下調(diào)，其中包括一些重要的發(fā)育相關(guān)基因以及腫瘤相關(guān)基因，比如．SNCG、

3、NOTCH、MBD3、WNTll、MAOA、FACL4等。 結(jié)論：DNMT3 B在肝癌細胞株中表達水平顯著高于正常肝細胞株以及癌旁細胞株。在肝癌細胞系中，RNA干擾能有效的抑制DNMT3B的表達。 在DNMT3B經(jīng)過RNAi后，表達水平改變了的基因可能是DNMT3B調(diào)控的下游基因，DNMT3B或許是通過甲基化的作用對這些基因的表達起到了重要的調(diào)控作用。因此，DNMT3B可能是通過對下游基因甲基化作用的調(diào)控來控制下游基因的