STAT3基因RNAi和杠柳苷誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡以及對(duì)STAT3信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：觀察STAT3基因特異性RNAi和杠柳苷對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC7721凋亡的影響，分析其對(duì)SMMC7721細(xì)胞STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控作用和對(duì)STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)分子基因表達(dá)的影響，為STAT3信號(hào)通路的腫瘤靶向治療提供理論依據(jù)。 方法： 1.采用RNAi技術(shù)，特異性沉默SMMC7721細(xì)胞中STAT3的表達(dá)，通過(guò)Western blot技術(shù)和半定量RT-PCR法檢測(cè)經(jīng)RNAi作用后SMMC7721細(xì)胞STAT

2、3表達(dá)水平的變化。 2.采用透射電鏡和流式細(xì)胞技術(shù)分析經(jīng)RNAi特異性沉默SMMC7721細(xì)胞中STAT3的表達(dá)后，對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。通過(guò)半定量RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)因子bcl-2和survivin基因表達(dá)的變化。 3.以不同濃度的杠柳苷(2.5、5.0、10.0μg/ml)干預(yù)SMMC7721細(xì)胞，并設(shè)空白對(duì)照。干預(yù)12、24、48小時(shí)后，分別用MTT比色法分析細(xì)胞增殖情況。 4.通過(guò)半定量RT-PCR

3、法檢測(cè)2.5μg/ml杠柳苷作用不同時(shí)間(12、24、48h)后，SMMC7721細(xì)胞STAT3基因表達(dá)水平的變化。 5.應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分析2.5μg/ml杠柳苷作用于SMMC7721細(xì)胞不同時(shí)間(12、24、48h)后，對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。采用半定量RT-PCR法檢測(cè)杠柳苷對(duì)SMMC7721細(xì)胞凋亡相關(guān)因子bcl-2和survivin基因表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.STAT3基因特異性RNAi可有效沉默SMMC7

4、721細(xì)胞中STAT3的表達(dá)。 2.STAT3的表達(dá)被RNAi特異性沉默后，SMMC7721細(xì)胞凋亡的百分比明顯增加，與對(duì)照組相比有顯著性差異。bcl-2和survivin mRNA的表達(dá)水平均受到明顯抑制，與對(duì)照組相比有顯著性差異。 3.與對(duì)照組相比較，杠柳苷各實(shí)驗(yàn)組SMMC7721細(xì)胞增殖水平明顯下降。并且隨藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng)，2.5μg/ml杠柳苷作用24h對(duì)細(xì)胞的抑制率可達(dá)到48.31％。

5、 4.半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示，杠柳苷處理后，SMMC7721細(xì)胞中STAT3mRNA的表達(dá)水平明顯降低，與對(duì)照組相比有顯著性差異。 5.杠柳苷可顯著增加SMMC7721細(xì)胞凋亡的百分比，2.5μg/ml的杠柳苷作用12h、24h、48h的SMMC7721細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組相比明顯增高，有顯著性差異。杠柳苷處理后，SMMC7721細(xì)胞bcl-2、survivinmRNA表達(dá)受到明顯抑制，與對(duì)照組相比有顯著性差異。

6、 結(jié)論： 1.STAT3基因特異性RNAi可有效沉默SMMC7721細(xì)胞中STAT3的表達(dá)。 2.STAT3基因特異性RNAi可誘導(dǎo)SMMC7721細(xì)胞凋亡，并下調(diào)SMMC7721細(xì)胞bcl-2、survivin mRNA的表達(dá)。 3.杠柳苷可明顯抑制SMMC7721細(xì)胞的增殖。 4.杠柳苷可抑制SMMC7721細(xì)胞中STAT3的表達(dá)。 5.杠柳苷可誘導(dǎo)SMMC7721細(xì)胞凋亡，下調(diào)SMMC