內(nèi)生放線菌KLBMP2170抗楊樹(shù)褐斑病活性及機(jī)理研究.pdf

1、本文通過(guò)對(duì)紅豆杉的內(nèi)生放線菌進(jìn)行分離，從其根、莖、葉中共分離出212株放線菌，通過(guò)對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)特征、形態(tài)特征的觀察、16S rRNA基因測(cè)序以及序列分析，表明鏈霉菌屬為優(yōu)勢(shì)類(lèi)群，其中111株為鏈霉菌，它們被分為8個(gè)分類(lèi)群，分別為白孢類(lèi)群(Albosporus）、黃色類(lèi)群(Flavus)、玫瑰孢類(lèi)群(Roseosporus)、格勞科斯(Glaucus)、燼灰類(lèi)群(Cinereus)、灰紅紫類(lèi)群(Griseorubroviolaceus)、

2、灰褐類(lèi)群(Griseofuscus)、金色類(lèi)群(Aureus)。
　　對(duì)分離得到的111株鏈霉菌進(jìn)行抑制楊樹(shù)褐斑病病原真菌活性篩選，結(jié)果顯示：KLBMP2009，KLBMP2051，KLBMP2061，KLBMP2078，KLBMP2088，KLBMP2170，KLBMP2174，KLBMP2176等都對(duì)楊樹(shù)褐斑病病原真菌具有抑制活性，但KLBMP2170的活性最強(qiáng)。然后就針對(duì)KLBMP2170進(jìn)行研究，首先通過(guò)對(duì)紅豆杉內(nèi)生放線菌

3、KLBMP2170進(jìn)行同源性測(cè)定，測(cè)定結(jié)果為：KLBMP2170保守序列為1488bp，并運(yùn)用EzTaxon數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相似性比對(duì)，比對(duì)結(jié)果表明：KLBMP2170為鏈霉菌屬成員，與Streptomyces armeniacus相似性達(dá)到97.84％，與Streptomyces artemisiae相似性達(dá)到97.38%，除此之外，KLBMP2170在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)上獨(dú)立成一分支，因此KLBMP2170可能為潛在的鏈霉菌屬新種。
　　以

4、楊樹(shù)褐斑病病原真菌Marssonina brunneaCFCC89647為供試病原菌，以KLBMP2170發(fā)酵液對(duì)CFCC89647的抑菌率為指標(biāo)，進(jìn)行KLBMP2170培養(yǎng)基優(yōu)化和發(fā)酵條件優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果為：淀粉含量為10g/L，酵母浸膏含量為10g/L，葡萄糖含量為11g/L，(NH4)2SO4含量為4.0g/L，pH=7.0，培養(yǎng)時(shí)間為7d，溫度為28℃，轉(zhuǎn)數(shù)為160r/min。
　　對(duì)KLBMP2170菌株發(fā)酵液的穩(wěn)定性及作

5、用機(jī)理研究,研究結(jié)果證明KLBMP2170發(fā)酵液對(duì)光照、紫外線的穩(wěn)定性較好，但在PH<5，溫度大于120時(shí)℃時(shí)穩(wěn)定性有所下降。另外KLBMP2170發(fā)酵液中的活性代謝產(chǎn)物能裂解楊樹(shù)褐斑病病原真菌的細(xì)胞壁，導(dǎo)致菌體空間結(jié)構(gòu)塌陷，并且對(duì)細(xì)胞膜系統(tǒng)的完整性造成影響，導(dǎo)致菌體胞內(nèi)內(nèi)含物外漏，使得胞內(nèi)蛋白含量減少，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
　　根據(jù)楊樹(shù)葉片石蠟切片的對(duì)比照片，健康楊樹(shù)感染褐斑病病原菌后，菌絲侵入楊樹(shù)葉片的柵欄組織和海綿組織，主要是侵入

6、葉片柵欄組織，使其細(xì)胞排列由緊密有序變得疏松雜亂，并出現(xiàn)明顯胞間隙。另外通過(guò)楊樹(shù)葉片離體、活體實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明無(wú)論在離體還是活體條件下KLBMP2170發(fā)酵液對(duì)楊樹(shù)病原菌均有抑制作用。
　　對(duì)KLBMP2170發(fā)酵液乙酸乙酯相活性組分進(jìn)行GC-MS分析,共鑒定19個(gè)化合物，其中苯乙酸（phenylacetic acid）、丁香酚（eugenol）、丁位十二內(nèi)酯（Dodecalactone）為已報(bào)道的具有抑制真菌活性的化合物，并對(duì)其進(jìn)