水稻內(nèi)生放線菌OsiLf-2的分離、鑒定及其抗稻瘟病研究.pdf

1、稻瘟病(Rice Blast)是由真菌梨孢霉（Magnaporthe grisea）引起的一種嚴(yán)重的水稻疾病，是近幾十年來制約水稻高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的最主要因素之一。目前其防治手段主要依賴于化學(xué)農(nóng)藥和抗性育種，但化學(xué)農(nóng)藥所帶來的環(huán)境危害及新的致病生理小種的不斷出現(xiàn)，使我們迫切需要尋找一種綠色、可持續(xù)的的稻瘟病防治手段。植物內(nèi)生放線菌不需與土壤微生物競爭，并可以通過直接殺死病原菌或通過促進寄主植物的生長和誘發(fā)免疫反應(yīng)來間接提高植物抗病性，已作為一種

2、新型的抗稻瘟病資源受到關(guān)注。本文從不同病斑生成狀況的水稻葉片中分離并篩選出一株能夠明顯抑制稻瘟病菌生長的內(nèi)生放線菌OsiLf-2，對其拮抗性能、培養(yǎng)條件和活性物質(zhì)開展了研究，為進一步深入了解該內(nèi)生放線菌抗病機制及其農(nóng)業(yè)開發(fā)利用提供依據(jù)。主要的研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1、采用不同的分離培養(yǎng)基，分離不同病斑生成狀況的水稻葉片中的內(nèi)生放線菌。利用平板對峙法對所分離出的內(nèi)生放線菌進行篩選，最后得到一株對稻瘟病病原菌有明顯拮抗效果的內(nèi)生放

3、線菌OsiLf-2。該菌對不同生理小種的稻瘟病菌均表現(xiàn)出較好的抑制效果，其中對稻瘟病菌Guy11的抑制率達83.0％，結(jié)合形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析鑒定其為產(chǎn)水鏈霉菌(Streptomyces hydrogenans)。
　　2，利用掃描電子顯微鏡觀察OsiLf-2對稻瘟病菌菌絲的影響，結(jié)果顯示經(jīng)OsiLf-2處理后的稻瘟病菌RB3菌絲呈現(xiàn)了明顯的畸形和扭曲。進一步探究不同培養(yǎng)條件下OsiLf-2的

4、生長狀況及其發(fā)酵液的拮抗性能，發(fā)現(xiàn)其能在多種培養(yǎng)基下生長，尤其在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基如ISP2和PDB中生長狀況好，且其發(fā)酵液的拮抗能力也突出，第5天發(fā)酵液對稻瘟病菌RB3菌絲抑制率分別達到63.3％和68.4％。同時，培養(yǎng)初始pH為7，培養(yǎng)溫度35℃分別對OsiLf-2的生長最為有利，其發(fā)酵液的抑菌活性也最強。除此之外，OsiLf-2發(fā)酵液也表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，用蛋白酶K、低溫、強光照和紫外光照分別處理一個小時，其發(fā)酵液均能保持完整的抑菌

5、活性;強酸和強堿分別處理一個小時，也能保持較好的抑菌活性;甚至在100℃處理一個小時后，其發(fā)酵液仍然保留了大部分的抑菌活性。
　　3、對OsiLf-2產(chǎn)生的拮抗稻瘟病相關(guān)物質(zhì)進行檢測，發(fā)現(xiàn)OsiLf-2能夠產(chǎn)生蛋白酶、鐵載體等抑菌物質(zhì)。用不同極性的萃取劑對其拮抗物質(zhì)進行萃取，發(fā)現(xiàn)OsiLf-2菌體和培養(yǎng)物的乙酸乙酯及石油醚萃取物顯示出良好的抑菌活性，且石油醚萃取物的抑菌活性最強。對OsiLf-2產(chǎn)生的促生長相關(guān)物質(zhì)進行檢測，發(fā)現(xiàn)O

6、siLf-2能夠分泌鐵載體、合成IAA和ACC脫氨酶等促生長物質(zhì)，采用培養(yǎng)了OsiLf-27天后的PDA培養(yǎng)基，探究其對水稻生長的影響，發(fā)現(xiàn)，處理后的水稻幼苗株高和根長、地上部和根部分干物質(zhì)量及葉綠素含量(SPAD值)較對照分別增加10％、34％、48％、10％和16％，表明OsiLf-2的代謝產(chǎn)物中含有對水稻起促生作用的成分。
　　綜上表明，內(nèi)生放線菌OsiLf-2對稻瘟病菌有較好的抑制效果，對水稻幼苗有一定的促生效果，而且其分