皂角苷佐劑對大菱鲆黏膜組織抗原呈遞的影響.pdf

1、細菌性疾病至今仍是導致養(yǎng)殖魚類發(fā)病死亡的最主要原因。世界范圍內,已發(fā)現(xiàn)有超過20種以上的病原菌可以造成養(yǎng)殖魚類巨大經濟損失。因而針對魚類病原菌開展免疫預防研究具有十分重要的意義。傳統(tǒng)的魚病預防與治療手段主要是使用各種抗生素、消毒劑等化學藥物,這使得魚體的耐藥性增強,免疫力下降,同時魚體里殘留的藥物及受到污染的水環(huán)境也嚴重影響食品安全和人類的健康。應用魚類疫苗接種在防治魚類細菌性病害方面已經取得了良好的效果,魚用疫苗的接種方式中以浸泡疫苗

2、接種免疫最為簡單、安全,經常作為免疫接種的首選方法。但在浸泡免疫過程中,抗原呈遞主要通過體表皮膚及鰓絲等部位,單獨使用未加佐劑的浸泡疫苗,抗原呈遞效果差,免疫保護率不佳或沒有效果。因而,研究開發(fā)高效、低毒的浸泡佐劑日益受到了國內外研究者的關注。本文選用課題組已經篩選到的皂角苷為佐劑,與鰻弧菌疫苗聯(lián)合浸泡免疫大菱鲆,研究皂角苷作用于大菱鲆體表前后,體表黏膜組織對抗原吸收強度、抗原在黏膜組織中存留時間的變化,探討皂角苷對黏膜組織吸收抗原的促

3、進作用。
　　本研究主要包括4個部分內容:
　　第一部分:用異硫氰酸熒光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)為標記物,對幾種常見的海水環(huán)境中的病原菌及有益菌進行標記,并對標記條件進行優(yōu)化。結果表明,FITC標記鰻弧菌的最適標記濃度范圍為20?g/mL~100?g/mL,最適標記時間范圍60min~120min,儲藏在-20℃和-70℃條件下,標記后的鰻弧菌熒光信號比儲藏在4℃和25℃穩(wěn)定,標記

4、后鰻弧菌經甲醛滅活后的熒光信號穩(wěn)定性優(yōu)于對照組,不同強度自然光照對標記鰻弧菌的熒光衰減效果不明顯,標記鰻弧菌經3次凍融,發(fā)現(xiàn)在-70℃條件下凍存的鰻弧菌熒光信號穩(wěn)定性保持良好。本研究結果為FITC用于標記海洋細菌提供了實用的技術參數(shù)。
　　第二部分:用標記的鰻弧菌與皂角苷聯(lián)合浸泡免疫大菱鲆,對其主要的黏膜組織鰓絲和體表不同部位的皮膚進行熒光檢測。結果表明,皂角苷的使用可以增強魚體對抗原的呈遞作用,大菱鲆鰓絲的表皮層有熒光團的富集,

5、隨著皂角苷濃度的增加和浸泡時間的延長,熒光團數(shù)和熒光強度逐漸升高。對體表不同部位皮膚檢測,背面皮膚的熒光強度高于腹面,且背面鰓緣處皮膚和側線處皮膚的熒光強度明顯高于其他處皮膚,這些熒光信號存在于表皮層中,表明鰓緣和側線處皮膚是兩個重要的抗原提呈部位,這些抗原呈遞細胞存在于組織的表皮層中。
　　第三部分:在第二部分的基礎上,用標記細菌和間接熒光免疫兩種方法檢測黏膜組織對抗原吸收強度、抗原在黏膜組織中存留時間的變化。結果表明,兩種檢測

6、方法互為補充,提高了結果的準確性。皂角苷聯(lián)合疫苗浸泡組,隨著浸泡時間的延長,黏膜組織(鰓絲和鰓緣及側線處皮膚)表皮層的熒光強度增加,且高濃度(40mg/L)比低濃度的(20mg/L)的皂角苷浸泡免疫組熒光強度強。表明皂角苷作為魚類浸泡免疫的佐劑有增強黏膜免疫的作用,為促進黏膜免疫對抗原的吸收開辟了新的研究方向,也給鰻弧菌及其他海水養(yǎng)殖病原菌的防控提供了新的技術參考。
　　第四部分:采用組織切片和掃描電鏡的方法對皂角苷的抗原提呈過程