皂角苷佐劑對(duì)大菱鲆黏膜組織抗原呈遞的影響.pdf

1、細(xì)菌性疾病至今仍是導(dǎo)致養(yǎng)殖魚類發(fā)病死亡的最主要原因。世界范圍內(nèi),已發(fā)現(xiàn)有超過20種以上的病原菌可以造成養(yǎng)殖魚類巨大經(jīng)濟(jì)損失。因而針對(duì)魚類病原菌開展免疫預(yù)防研究具有十分重要的意義。傳統(tǒng)的魚病預(yù)防與治療手段主要是使用各種抗生素、消毒劑等化學(xué)藥物,這使得魚體的耐藥性增強(qiáng),免疫力下降,同時(shí)魚體里殘留的藥物及受到污染的水環(huán)境也嚴(yán)重影響食品安全和人類的健康。應(yīng)用魚類疫苗接種在防治魚類細(xì)菌性病害方面已經(jīng)取得了良好的效果,魚用疫苗的接種方式中以浸泡疫苗

2、接種免疫最為簡單、安全,經(jīng)常作為免疫接種的首選方法。但在浸泡免疫過程中,抗原呈遞主要通過體表皮膚及鰓絲等部位,單獨(dú)使用未加佐劑的浸泡疫苗,抗原呈遞效果差,免疫保護(hù)率不佳或沒有效果。因而,研究開發(fā)高效、低毒的浸泡佐劑日益受到了國內(nèi)外研究者的關(guān)注。本文選用課題組已經(jīng)篩選到的皂角苷為佐劑,與鰻弧菌疫苗聯(lián)合浸泡免疫大菱鲆,研究皂角苷作用于大菱鲆體表前后,體表黏膜組織對(duì)抗原吸收強(qiáng)度、抗原在黏膜組織中存留時(shí)間的變化,探討皂角苷對(duì)黏膜組織吸收抗原的促

3、進(jìn)作用。
　　本研究主要包括4個(gè)部分內(nèi)容:
　　第一部分:用異硫氰酸熒光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)為標(biāo)記物,對(duì)幾種常見的海水環(huán)境中的病原菌及有益菌進(jìn)行標(biāo)記,并對(duì)標(biāo)記條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明,FITC標(biāo)記鰻弧菌的最適標(biāo)記濃度范圍為20?g/mL~100?g/mL,最適標(biāo)記時(shí)間范圍60min~120min,儲(chǔ)藏在-20℃和-70℃條件下,標(biāo)記后的鰻弧菌熒光信號(hào)比儲(chǔ)藏在4℃和25℃穩(wěn)定,標(biāo)記

4、后鰻弧菌經(jīng)甲醛滅活后的熒光信號(hào)穩(wěn)定性優(yōu)于對(duì)照組,不同強(qiáng)度自然光照對(duì)標(biāo)記鰻弧菌的熒光衰減效果不明顯,標(biāo)記鰻弧菌經(jīng)3次凍融,發(fā)現(xiàn)在-70℃條件下凍存的鰻弧菌熒光信號(hào)穩(wěn)定性保持良好。本研究結(jié)果為FITC用于標(biāo)記海洋細(xì)菌提供了實(shí)用的技術(shù)參數(shù)。
　　第二部分:用標(biāo)記的鰻弧菌與皂角苷聯(lián)合浸泡免疫大菱鲆,對(duì)其主要的黏膜組織鰓絲和體表不同部位的皮膚進(jìn)行熒光檢測。結(jié)果表明,皂角苷的使用可以增強(qiáng)魚體對(duì)抗原的呈遞作用,大菱鲆鰓絲的表皮層有熒光團(tuán)的富集,

5、隨著皂角苷濃度的增加和浸泡時(shí)間的延長,熒光團(tuán)數(shù)和熒光強(qiáng)度逐漸升高。對(duì)體表不同部位皮膚檢測,背面皮膚的熒光強(qiáng)度高于腹面,且背面鰓緣處皮膚和側(cè)線處皮膚的熒光強(qiáng)度明顯高于其他處皮膚,這些熒光信號(hào)存在于表皮層中,表明鰓緣和側(cè)線處皮膚是兩個(gè)重要的抗原提呈部位,這些抗原呈遞細(xì)胞存在于組織的表皮層中。
　　第三部分:在第二部分的基礎(chǔ)上,用標(biāo)記細(xì)菌和間接熒光免疫兩種方法檢測黏膜組織對(duì)抗原吸收強(qiáng)度、抗原在黏膜組織中存留時(shí)間的變化。結(jié)果表明,兩種檢測

6、方法互為補(bǔ)充,提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。皂角苷聯(lián)合疫苗浸泡組,隨著浸泡時(shí)間的延長,黏膜組織(鰓絲和鰓緣及側(cè)線處皮膚)表皮層的熒光強(qiáng)度增加,且高濃度(40mg/L)比低濃度的(20mg/L)的皂角苷浸泡免疫組熒光強(qiáng)度強(qiáng)。表明皂角苷作為魚類浸泡免疫的佐劑有增強(qiáng)黏膜免疫的作用,為促進(jìn)黏膜免疫對(duì)抗原的吸收開辟了新的研究方向,也給鰻弧菌及其他海水養(yǎng)殖病原菌的防控提供了新的技術(shù)參考。
　　第四部分:采用組織切片和掃描電鏡的方法對(duì)皂角苷的抗原提呈過程