三七總皂苷對(duì)藥物代謝酶的影響.pdf

1、目的：
　　1、研究三七總皂苷對(duì)小鼠肝臟谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶的抑制作用及其動(dòng)力學(xué)分析。
　　2、研究三七總皂苷對(duì)大鼠肝組織內(nèi)藥物代謝酶CYP3A的抑制作用及其動(dòng)力學(xué)分析。
　　3、研究三七總皂苷對(duì)大鼠血清及肝組織內(nèi)抗氧化酶活性的影響。
　　4、研究三七總皂苷對(duì)大鼠肝組織內(nèi)細(xì)胞色素P450和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶活性的影響。
　　方法：
　　1、采用差速離心法制備小鼠胞質(zhì)液

2、酶，用半數(shù)效量概率單位法及Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法求得小鼠肝臟GST的米氏常數(shù)（Km）、最大反應(yīng)速度（Vmax）和三七總皂苷對(duì)小鼠肝臟 GST的半數(shù)抑制濃度（IC50）以及判斷三七總皂苷對(duì)GST的抑制類型和抑制常數(shù)（Ki、Kis）。
　　2、采用差速離心法制備大鼠微粒體酶，用半數(shù)效量概率單位法及Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法求得大鼠肝臟CYP3A的米氏常數(shù)（Km）、最大反應(yīng)速度（Vmax）和三七總皂苷

3、對(duì)大鼠肝臟 CYP3A的半數(shù)抑制濃度（IC50）以及判斷三七總皂苷對(duì)CYP3A的抑制類型和抑制常數(shù)（Ki）。
　　3、將大鼠鼠隨機(jī)分成四組，每組8只。大鼠按100 mg?kg-1、200 mg?kg-1、400 mg?kg-1分別灌胃給予三七總皂苷，空白組給等體積蒸餾水連續(xù)給藥38天。全部大鼠末次給藥后24h股動(dòng)脈取血，分離血清，測(cè)定抗氧化酶活性及自由基濃度；取肝臟勻漿，4000r?min-1低溫離心，取一部分上清液測(cè)定一系列抗氧

4、化酶活性及自由基濃度。
　　4、將大鼠鼠隨機(jī)分成六組，每組8只。大鼠按100 mg?kg-1、200 mg?kg-1、400 mg?kg-1分別灌胃給予三七總皂苷，空白組給等體積蒸餾水連續(xù)給藥38天，苯巴比妥組與地塞米松組第36天按80 mg?kg-1腹腔注射，連續(xù)3天。分離肝臟，用差速離心法制備肝臟微粒體及胞漿液，采用雙光束紫外分光光度法測(cè)定細(xì)胞色素b5的含量，一相代謝酶NADPH-細(xì)胞色素C還原酶、CYP3A、CYP2E1和二

5、相代謝酶GST、UGT的活性。
　　結(jié)果：
　　1、三七總皂苷對(duì)小鼠肝臟GST有抑制作用，其 IC50是189.54mg?L-1；對(duì)底物還原型谷胱甘肽（GSH），GST的Km是0.4563 mmol?L-1，Vmax是476.19U?mg-1；對(duì)底物1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB），GST的Km是0.1097 mmol?L-1，Vmax是400.00U?mg-1。對(duì)底物GSH，三七總皂苷對(duì)小鼠肝臟GST屬于混合性抑制，其

6、抑制常數(shù)Ki是0.27g?L-1，Kis是0.68g?L-1；對(duì)底物CDNB，三七總皂苷對(duì)小鼠肝臟GST屬于混合性抑制，其抑制常數(shù)Ki是0.21g?L-1，Kis是0.66g?L-1。
　　2、三七總皂苷對(duì)大鼠肝組織CYP3A有抑制作用，其IC50是689.54mg?L-1；對(duì)底物氨基比林，CYP3A的Km是0.036 mmol?L-1，Vmax是21.01nmol?min-1?mg-1；三七總皂苷對(duì)大鼠肝組織CYP3A屬于混合性

7、抑制，其抑制常數(shù)Ki是247.79mg?L-1，Kis是321.79mg?L-1。
　　3、在大鼠血清中，PNS400mg?kg-1組與空白組比較能升高Cr含量（p<0.05），PNS400mg?kg-1組與空白組比較能降低 SOD活性(p<0.05）；PNS400mg?kg-1組、PNS100mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低 GSH-PX活性（p<0.01），能降低NO含量（p<0.05）；PNS200mg?kg-1組與空

8、白組比較能顯著降低 NO含量（p<0.01）。在大鼠肝組織中，PNS400mg?kg-1組、PNS100mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低 NOS活性（p<0.01）；PNS400mg?kg-1組與空白組比較能降低 MDA含量(p<0.05）；PNS400mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低 NO含量(p<0.01）；PNS400mg?kg-1組與空白組比較能顯著升高GST活性（p<0.05）。
　　4、PNS400mg?k

9、g-1組與空白組比較能升高 GST的活性(p<0.05）；PNS400mg?kg-1組、PNS200mg?kg-1組與空白組比較能顯著降低UGT活性(p<0.01）；苯巴比妥鈉組與空白組比較，顯著誘導(dǎo) CYP3A的活性（p<0.05）；非常顯著誘導(dǎo)GST、UGT的活性（p<0.01），但對(duì)NADPH-細(xì)胞色素C還原酶沒有影響；地塞米松組與空白組比較，顯著誘導(dǎo)UGT的活性（p<0.05）；非常顯著性誘導(dǎo)NADPH-細(xì)胞色素C還原酶、CYP

10、3A的活性（p<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、三七總皂苷對(duì)小鼠肝臟GST的活性有明顯抑制作用。
　　2、三七總皂苷對(duì)大鼠肝臟CYP3A的活性有明顯抑制作用。
　　3、PNS400mg?kg-1組能升高血清 Cr含量，說明在大劑量使用三七時(shí)可能對(duì)腎臟有損害；三七總皂苷對(duì)大鼠肝組織里一系列抗氧化酶的活性和自由基的含量影響很小。
　　4、三七總皂苷對(duì)細(xì)胞色素 P450沒有影響，PNS400mg?kg-1組能升