持續(xù)性炎癥誘發(fā)脂代謝紊亂與三七總皂苷及其活性代謝單體的作用研究.pdf

1、脂代謝的任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常均可出現(xiàn)脂代謝紊亂，表現(xiàn)為血脂各成分水平的異常改變和組織中脂質的異常沉積。大量流行病學調查顯示，脂代謝紊亂與多種嚴重威脅人類健康的疾病密切相關，包括腦卒中、動脈粥樣硬化和糖尿病等。既往觀點認為，遺傳性因素是脂代謝紊亂最重要的發(fā)病原因，其次是飲食習慣等后天因素。 本室研究結果提示，持續(xù)性炎癥可導致脂代謝異常，全基因組基因芯片檢測結果也進一步印證了這一觀點。同時，近年來國外大規(guī)模人群流行病學調查結果顯示系統(tǒng)性

2、紅斑狼瘡和風濕性關節(jié)炎等慢性炎癥疾病患者出現(xiàn)了明顯的血脂代謝紊亂，進一步說明持續(xù)性炎癥刺激極可能是發(fā)生脂代謝紊亂的新的重要因素。目前國內外在此方面的研究也鮮有報道，特別是基礎實驗研究尚未見報道。另外，脂質的異常沉積，尤其是脂質在動脈壁下的沉積，即動脈粥樣硬化的形成，對健康的危害巨大。而巨噬細胞源性泡沫細胞形成是動脈壁下的脂質沉積最重要的啟動因素，為此，本研究采用體外培養(yǎng)泡沫細胞為模型，觀察炎癥刺激對泡沫細胞形成的影響。 三七總皂

3、苷(PNS)是三七中主要的活性成分，既往研究表明，PNS具有保護心肌、降低動脈血壓、改善脂代謝紊亂及顯著的抗炎能力。IH901是PNS在利用模擬生物體腸道微生態(tài)環(huán)境中反應得到的活性代謝單體。本研究通過在體實驗觀察了PNS作用，并在離體實驗中觀察了IH901的作用。 方法： 為觀察持續(xù)性炎癥刺激對高脂飲食大鼠血脂代謝情況的影響，將動物分為高脂飲食、疊加炎癥、PDTC和PNS組。所有動物均給予高脂飲食，疊加炎癥組動物腹腔注射

4、酵母多糖-石蠟混懸液(20mg/kg，i.p.，5天1次)，PDTC和PNS組動物除按疊加炎癥組處理外，分別每天給予PDTC(100mg/kg，i.p.)和PNS(120mg/kg，i.g.)。 為探討持續(xù)性炎癥刺激對大鼠血脂代謝影響的原因，將動物分為正常對照、單純炎癥、PDTC治療和PNS治療組。所有動物均給予正常飲食，單純炎癥組動物腹腔注射酵母多糖-石蠟混懸液(20mg/kg，i.p.，5天1次)，PDTC治療和PNS治療組

5、動物除按單純炎癥組處理外，分別每天給予PDTC(100mg/kg，i.p.)和PNS(120mg/kg，i.g.)。 為研究炎癥刺激對泡沫細胞內脂質沉積的影響，將培養(yǎng)的泡沫細胞分為泡沫細胞、炎癥刺激、PDTC和IH901組。炎癥刺激組給予LPS(20mg/L)進行刺激，在炎癥刺激的基礎上，PDTC和IH901組分別給予相應的試劑(PDTC25μM；IH90125μM)。 TNF-α采用ELISA法測定；TG、LDL、HD

6、L、TC、CE、LPL活性使用相應的試劑盒測量；LPL、HMG-CoA還原酶、PPARα、PPARγ、CD36、ABCA1、Perilipin和LXRmRNA水平用RT-PCR法檢測，LPL、perilipin和NF-κB蛋白表達水平用westernblotting法測量，泡沫細胞染色采用油紅O。 結果： 1.持續(xù)性炎癥能夠明顯加重高脂飲食動物的血脂代謝紊亂情況。疊加炎癥組動物血清中TC、TG和LDL較高脂飲食組有明顯升

7、高，而HDL水平明顯下降，其變化與動物體內炎癥反應強度(TNF-α水平)呈平行性變化。持續(xù)性炎癥能誘發(fā)正常飲食動物血脂紊亂，使TC、TG、LDL升高，HDL降低，與動物體內炎癥反應強度變化平行。 2.持續(xù)性炎癥刺激能減少LPL的表達(mRNA和蛋白水平)、降低了LPL的活性，同時增加了HMG-CoA還原酶mRNA的表達，并降低了PPARα/γ的表達。 3.同給予持續(xù)性炎癥刺激動物相比，PDTC能夠顯著降低動物血清中的TN

8、F-α水平，提高LPL的活性，增高LPL的表達(mRNA和蛋白水平)，降低HMG-CoA還原酶mRNA的表達，增高PPARα/γ的表達。 4.PNS能夠降低TNF-α、TC、TG、LDL水平，升高HDL水平，增加LPL的表達、提高LPL的活性，同時降低HMG-CoA還原酶的表達，并增高PPARα/γ的表達。 5.炎癥刺激使泡沫細胞內的脂質沉積顯著升高(TC、CE和CE/TC水平均升高)，與炎癥反應強度(TNF-α水平)變

9、化平行。 6.炎癥刺激導致perilipin表達升高(mRNA和蛋白水平)及CD36、ABCA1、PPARγ和LXRmRNA表達降低。 7.PDTC能夠降低炎癥刺激導致的脂質沉積增加，使CD36、ABCA1、PPARγ和LXRmRNA表達增高，perilipin表達降低(mRNA和蛋白水平)。 8.IH901能夠顯著降低炎癥刺激導致的泡沫細胞內的脂質沉積增加，使ABCA1、PPARγ和LXRmRNA表達增高，CD

10、36mRNA、perilipin(mRNA和蛋白)表達降低。 結論： 1.持續(xù)性炎癥刺激可以通過降低LPL和增高HMG-CoA還原酶表達以誘發(fā)/加重大鼠的脂代謝紊亂，其機制與持續(xù)性炎癥刺激對PPARα/γ的影響相關。 2.炎癥刺激可以引起體外培養(yǎng)的泡沫細胞內脂質沉積增加，其機制與炎癥刺激導致perilipin表達增高和ABCA1表達降低有關。 3.三七總皂苷口服能夠明顯減輕炎癥刺激誘發(fā)/加重的大鼠脂代謝紊