重組腺病毒介導(dǎo)入FEZ1基因?qū)η傲邢侔┘?xì)胞株DU145生長影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒介導(dǎo)入FEZ1基因?qū)η傲邢侔┘?xì)胞株DU145生長影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名：陳放申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（泌尿外科）指導(dǎo)教師：齊琳20100501同的前列腺細(xì)胞株的差異，PCR技術(shù)擴(kuò)增FEZl基因片段，并用CloneEZ技術(shù)和LR體外重組技術(shù)將FEZl基因片段克隆至腺病毒載體，酶切和測序方法對重組腺病毒載體pAdFEZl的鑒定。用MTT法、Hoechst染色法、流式細(xì)胞分析法等方法分析感染重組腺病毒載體pAd

2、—FEZl的DUl45細(xì)胞增殖凋亡。研究分以下三個(gè)部分：第一部分：FEZI基因在不同前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)差異及意義目的：了解不同前列腺細(xì)胞株中FEZl基因表達(dá)的差異。方法：利用RTPCR和Westernblot技術(shù)檢測正常前列腺上皮細(xì)胞(RWPE1)，雄激素非依賴型前列腺痛細(xì)胞株DU145，前列腺癌細(xì)胞株ALAV中FEZl基因的mRNA量和FEZl蛋白量，比較三組細(xì)胞FEZl基因的表達(dá)差異結(jié)果：在三株細(xì)胞中均有FEZl基因的表達(dá)，前列腺

3、正常上皮細(xì)胞RWPE1中的表達(dá)最強(qiáng)，而前列腺癌細(xì)胞DUl45、ALAV中的表達(dá)量相對較低。結(jié)論：FEZl基因在前列腺正常上皮組織高表達(dá)，而在前列腺腫瘤細(xì)胞株中低表達(dá)。兩種腫瘤細(xì)胞株表達(dá)無明顯差異，為FEZl基因在前列腺癌細(xì)胞生長影響研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第二部分重組腺病毒rAdFEZl的構(gòu)建及鑒定目的：擴(kuò)增人FEZl基因，構(gòu)建和鑒定重組腺病毒表達(dá)載體，穩(wěn)定表達(dá)FEZl基因的前列腺癌細(xì)胞株DUl45。方法：(1)采用PCR技術(shù)擴(kuò)增FEZl基