前列腺癌細胞系DU145中阿司匹林對基質(zhì)金屬蛋白酶9啟動子活性的影響.pdf

1、本文通過研究基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9，MMP9)啟動子片段的活性以及阿司匹林(Aspirin)對啟動子活性的調(diào)控，推測Aspirin在前列腺癌的防治方面的機制。 方法：①構(gòu)建含人MMP-9基因5側(cè)翼序列-1.28kb，-0.65kb，-0.54kb，-0.52kb和報告基因氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶(CAT，chloramphenicolacetyltransferase)的重組體pCAT1.2

2、8，pCAT0.65，pCAT0.54，pCAT0.52。②對DU145細胞進行體外培養(yǎng)，分別在24h，48h采用MTT(methylthiazolyltetrazolium，四甲基偶氮唑籃)法檢測不同濃度的Aspirin對DU145的毒性。找出對細胞生長無影響的藥物濃度范圍。③將含有目的基因的重組體瞬時轉(zhuǎn)染DU145細胞，并分為對照組，PMA(phorbol12-myristate13-acetate，佛波酯)刺激組，Aspirin干

3、擾組及PMA和Aspirin同時干擾組，采用CAT-ELISA的方法測定各組的CAT值。 結(jié)果：①成功構(gòu)建四個含有目的基因片斷的真核質(zhì)粒表達載體pCAT1.28，pCAT0.65，pCAT0.54，pCAT0.52。②低濃度的Aspirin(≤1mmol·L-1)對DU145細胞毒性無明顯差別(P＞0.05)。③與pCAT-basic對照組相比，在無PMA刺激的作用下，pCAT1.28和pCAT0.65的CAT表達量分別為對照組

4、的2倍和1.6倍，而在PMA的刺激下，pCAT1.28，pCAT0.65和pCAT0.54的CAT表達量分別為對照組的2.5倍，2.2倍和1.3倍。而pCAT0.52即使在PMA的刺激下CAT表達量升高也不明顯。與無干擾因素的組別比較，Aspirin對pCAT1.28，pCAT0.65活性具有明顯的抑制作用且這種抑制作用可以被PMA所抵消。 結(jié)論：①構(gòu)建的真核質(zhì)粒表達載體pCAT1.28，pCAT0.65，pCAT0.54，pC